几种海洋动物种质超低温冷冻保存方法研究

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生物种质资源一直是衡量一个国家综合国力和可持续发展的重要指标之一，而海洋中，蕴含了大部分的种质资源。然而，随着海水养殖业的快速发展，海洋生物，特别是海水养殖生物的种质退化现象日益严重，对于其种质资源的保护刻不容缓。种质细胞长期保存最有效的方法就是超低温冷冻保存，而超低温冷冻保存技术相关理论的发展，对于物种种质资源的保存、改良和对于渔业的可持续发展有着重要理论基础和指导价值。
　　1、三种对虾精子超低温冷冻保存研究
　　以日本囊对虾，中国明对虾，凡纳滨对虾作为实验材料，研究三种稀释液（天然海水，人工无钙海水，Hank's平衡盐溶液），三种抗冻剂（二甲基亚砜，丙二醇，丙三醇），三种稀释比例（5%，10%，15%），三种不同的降温程序对三种对虾精子超低温冷冻保存效果的影响。冻精解冻后通过台盼蓝染色的方法计算其存活率，结果显示，对于三种对虾，以天然海水作为稀释液，10%PG作为抗冻剂，4℃平衡20min，以-2℃/min降温至-40℃，-40℃平衡10℃，以-15℃/min降温至-150℃，然后投入液氮作为降温程序进行超低温冷冻保存效果最好，冻精解冻后存活率分别为75.33%±2.56%，69.00%±3.00%，23.33%±8.55%。
　　2、太平洋牡蛎担轮幼虫超低温冷冻保存研究
　　对太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）担轮幼虫进行超低温冷冻保存研究，通过从两种稀释液：天然海水（NSW）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），三种抗冻剂：丙二醇（PG）、丙三醇（GLY）、二甲基亚砜（DMSO），三种抗冻剂浓度:5%、10%、15%，三种糖类添加剂：海藻糖（Trehalose）、蔗糖（sucrose）、葡萄糖（glucose）以及两种不同的降温方法和三种降温速率。结果如下：在以NSW为稀释液，15%DMSO为抗冻剂，加入0.25mol/l海藻糖，用500ul麦管，4℃平衡20min，以-1.5℃/min的速率降温至-40℃，在-40℃下停留10min后直接投入液氮，37℃10s解冻后，担轮幼虫的存活率最高，为66.14%，并对解冻后担轮幼虫的形态进行观察，发现解冻后担轮幼虫的形态对其存活率也有一定的影响。
　　3、大菱鲆精原干细胞超低温冷冻保存研究
　　本研究对不同时期的雄性大菱鲆性腺进行研究，结果发现12月龄的雄性大菱鲆性腺是进行精原干细胞冷冻保存的最佳实验材料。将12月龄雄性大菱鲆解剖后摘得性腺，将性腺进行消化后得分散的精原干细胞，之后分别将完整的性腺和分离的精原干细胞分别进行超低温冷冻保存，筛选出最佳冷冻保存方法。结果发现，对于精原干细胞来说，不同稀释液，不同抗冻剂和不同稀释比例对其冷冻保存的效果差异不显著，且冷冻保存效果较差；对于整个性腺来说，8%DMSO作为抗冻剂，1.0mol/l PBS作为稀释液时冷冻保存效果最好。

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作者
杨敬昆;
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作者单位

青岛农业大学;

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授予单位青岛农业大学;
学科水产养殖
授予学位硕士
导师姓名王文琪,刘清华;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类水产动物学;
关键词
日本囊对虾; 太平洋牡蛎; 大菱鲆; 种质资源; 超低温冷冻;

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