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hAECs对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及其与NF-κBp65的相关性研究

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缩略语表

前言

文献回顾

一．急性肺损伤简述

二．NF-κB在急性肺损伤中的作用

三．hAECs的研究进展

第一部分 建立脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 探索hAECs对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护性作用及相关机制

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

1.建立小鼠急性肺损伤模型：

2.hAECs对小鼠急性肺损伤的保护作用：

3. hAECs对NF-κB活性的影响：

参考文献

个人简历和研究成果

致谢

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摘要

背景：
　　急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是一种常见的临床综合症，其特点是顽固性低氧血症、进行性呼吸困难和非心源性肺水肿等。多种肺内外因素可引起急性肺损伤的发生，目前认为过度的炎症反应和抗炎失衡在其中发挥重要作用，但是具体发病机制还未完全阐明。临床上仍以支持治疗为主，病死率依然很高。核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是一组真核细胞转录因子，参与多种细胞活动，具有关键的生物学功能，尤其是调节机体的免疫应答和炎症反应。大量炎症因子的表达均与NF-κB的活化密切相关。可以说NF-κB在炎症的发生发展中处于关键环节，因此，抑制了NF-κB就能有效的抗炎，减轻肺损伤。
　　人羊膜上皮细胞（human amnion epithelial cells，hAECs）是羊膜上一层单层立方或柱状细胞，与羊水直接相接触。hAECs表达阶段特异性胚胎抗原-4（stage-specific embryonic antigen-4，SSEA-4）、SSEA-3、关键蛋白（NANOG）和八聚体物结合转录因子-4（octamer-binding transcription factor-4，OCT-4）等分子标志物，具有胚胎干细胞特性。hAECs具有向三个胚层组织细胞分化的能力，此外，hAECs不表达或很少表达Ⅰ型和Ⅱ型人类白细胞抗原，而且还表达免疫抑制型的人体白细胞抗原G，从而使hAECs具有很强的免疫豁免能力，在疾病治疗方面显示出很大的潜能。我们通过气管内给予脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）建立小鼠ALI模型，经气管内滴注hAECs进行治疗，探讨hAECs对急性肺损伤小鼠模型的治疗作用及其可能的机制。
　　目的：
　　（1）明确人羊膜上皮细胞（hAECs）是否对LPS所致急性肺损伤有治疗作用。
　　（2）明确人羊膜上皮细胞（hAECs）对NF-κBp65的影响，人羊膜上皮细胞的应用是否能减少NF-κBp65的表达，从而减轻肺损伤的炎症。
　　方法：健康成年雄性 C57BL/6小鼠随机分成正常对照组（Control）、hAECs对照组（hAECs）、模型组（LPS）和hAECs治疗组（LPS+hAECs），每组10只。模型组（LPS）的小鼠经口咽无创插管缓慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入PBS（50μl）；hAECs治疗组（LPS+hAECs）的小鼠经口咽无创插管缓慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入hAECs（1×107/ml，50μl）；hAECs对照组和正常对照组则经口咽插管注入等量hAECs或PBS。经过LPS处理后24h，正常处死小鼠，从心脏处收集血液并收集肺脏组织，右肺部分组织用来计算肺组织湿/干质量（W/D）比值；部分用于检测肺组织髓过氧化物酶（ MPO）活性；余下肺组织用来提取细胞浆/细胞核蛋白；左肺用于HE染色观察小鼠肺组织病理学改变；应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-6、IL-1β、IL-10及TNF-α含量；Western blot法检测肺组织核转录因子-κBp65（NF-κBp65）蛋白的表达。
　　结果：
　　与正常对照组相比，LPS处理后小鼠肺组织W/D增大，血清中IL-6、IL-1β及TNF-α含量增加(P＜0.05)，而IL-10的含量却有所减少(P＜0.05)；MPO活性明显增高；光学显微镜下观察，可见肺组织微血管破坏、肺泡间隔增厚、发生肺水肿、并有炎性细胞浸润、肺泡腔内出现渗出的红细胞，与ALI的病理变化相吻合；上述各项结果都表明经口咽插管滴注LPS诱导小鼠ALI的模型建立成功。应用hAECs后，我们发现hAECs可以减小LPS导致的肺W/D比值；血清中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量有一定的降低（P＜0.05），炎症因子IL-10水平则表现为上升（P＜0.05）；MPO活性降低；病理变化方面，hAECs明显改善LPS造成的肺组织损伤，肺水肿减轻，炎症反应减弱；表明hAECs在LPS诱导的ALI中有保护性作用。LPS处理组肺组织细胞浆中NF-κBp65蛋白比对照组中明显减少（P＜0.05），而其在细胞核中的含量明显增加（P＜0.05）；LPS+hAECs组肺组织细胞浆中NF-κBp65蛋白比LPS处理组有所增加，而细胞核中的NF-κBp65蛋白含量明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果提示hAECs在一定程度上抑制了NF-κBp65的核转位。
　　结论：
　　（1）hAECs可显著减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。
　　（2）hAECs减轻急性肺损伤的作用可能与降低肺组织中NF-κBp65的活性，减少炎症因子的产生有关。

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