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人细小病毒B19中国株VPI蛋白独特区基因片段克隆及序列分析

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目录

英文缩写词表

前 言

文献回顾

一.B19病毒的发现及其特征

二.B19病毒与人类疾病

三.B19病毒的研究方法

四.B19病毒基因变异研究

五.B19病毒基因表达研究

材料和方法

Ⅰ材料

一.研究对象

二.病毒来源

三.试剂

四.主要仪器设备

五.几种化学试剂的配制

Ⅱ方法

一.血标本DNA提取

二.PCR反应

三.基因克隆

四.核苷酸测序

五.蛋白初步表达

结 果

一.PCR扩增HPVB19 VP1独特区片段的结果

二.VP1-PUC19重组质粒的构建

三.HPVB19 VP1独特区克隆测序结果

四.蛋白初步表达结果

讨 论

一.B19病毒基因克隆技术的建立及其应用价值

二.B19病毒基因变异性及其流行病学意义

小 结

致 谢

参考文献

附 图

已发表论文

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摘要

目的:人细小病毒B19是一种可致人类多种疾病的小DNA病毒,主要经呼吸道和血液途径传播,可引起社区局部流行.B19病毒是由5.6Kb核苷酸组成,编码一个非结构蛋白(NS1)和两个结构蛋白(VP1、VP2).B19壳蛋白主要由VP2蛋白组成,VP1蛋白不超过壳蛋白的10﹪,其独特区暴露在病毒的表面.B19病毒的抗原表位区集中在VP1独特区和VP1-VP2连接区.只有HPVB19 VP1独特区和VP1-VP2连接区基因编码的蛋白,才能刺激机体产主保护性抗体.该文拟对VP1独特区基因克隆,进行基因组核苷酸序列分析及蛋白的初步表达,研究其基因的变异.结论:(1)该文采用自行设计引物,用PCR的方法能扩增出目的基因片段,扩增产物为480bp.(2)中国B19病毒VP1独特区基因与国外相应的基因相比,有2处变异,(3)VP1独特区基因的变异导致了其编码蛋白的变异.(4)VP1独特区基因的成功克隆及相应蛋白的初步表达为制备B19病毒诊断性试剂及保护性疫苗、防治B19病毒感染、控制其社区局部流行开创了广阔的前景.

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