碱性木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及重组木聚糖酶的特性

文摘

英文文摘

声明

第1章绪论

1.1概述

1.1.1半纤维素和木聚糖特性

1.1.2木聚糖降解酶系统

1.2研究进展

1.2.1产木聚糖酶酶的微生物

1.2.2木聚糖酶的理化性质

1.3木聚糖酶的纯化方法

1.4木聚糖酶活性的测定

1.5木聚糖酶的分子生物学

1.5.1木聚糖酶基因研究

1.5.2木聚糖酶基因的克隆与表达

1.6木聚糖酶的应用

1.6.1造纸工业

1.6.2食品工业

1.6.3饲料工业

1.6.4纺织工业

1.6.5酿酒工业

1.6.6木聚糖酶在其它方面的应用

1.7研究目的和意义

1.8研究内容

第2章碱性木聚糖酶基因的扩增及在大肠杆菌中的表达

2.1实验材料

2.1.1菌株和质粒

2.1.2试剂

2.1.3培养基及主要试剂配制

2.1.4实验仪器

2.2实验方法

2.2.1质粒pCT124转入大肠杆菌E.coli DH5á

2.2.2提取质粒pCT124

2.2.3 PCR反应引物的设计

2.2.4 PCR扩增反应及PCR产物的纯化

2.2.5 DNA的琼脂糖凝胶电泳

2.2.6琼脂糖凝胶中DNA片段的回收

2.2.7木聚糖酶基因原核表达载体pGEX—xylA的构建

2.2.8 pGEX—xylA转化大肠杆菌E.coli DHSá

2.2.9鉴定阳性转化子

2.2.10酶切分析

2.2.11重组子的诱导表达

2.2.12 SDS—PAGE鉴定表达蛋白

2.2.13其他

2.3结果与分析

2.3.1质粒pCT124转化大肠杆菌

2.3.2 pCT124质粒的提取

2.3.3 PCR克隆碱性木聚糖酶基因

2.3.4碱性木聚糖酶基因原核表达载体pGEX—xylA的构建及筛选

2.3.5耐碱性木聚糖酶基因的序列分析

2.3.6重组蛋白在E.coli中诱导表达及鉴定

2.4讨论

2.4.1基因表达系统的选择

2.4.2表达载体的选择

第3章 木聚糖酶粗酶酶学性质和应用性质的研究

3.1实验材料

3.1.1菌株

3.1.2培养基

3.1.3试剂配制

3.1.4实验仪器

3.2实验方法

3.2.1含重组质粒pGE-xyl的E.coli DH5á活化及诱导表达

3.2.2木聚糖酶活力测定

3.2.3胞外、胞内和周质空间的木聚糖酶分布

3.2.4木聚糖酶的等电点

3.2.5木聚糖酶的最适作用温度及热稳定性

3.2.6木聚糖酶的耐热性试验

3.2.7木聚糖酶的最适作用pH

3.2.8木聚糖酶的碱稳定性试验

3.2.9金属离子、螯合剂和表面活性剂对木聚糖酶活力的影响

3.3结果与分析

3.3.1木糖标准曲线的绘制

3.3.2木聚糖酶的等电点

3.3.3木聚糖酶作用的最适温度

3.3.4木聚糖酶的耐热性试验

3.3.5木聚糖酶作用的最适pH和对pH的稳定性

3.3.6金属离子对木聚糖酶活性的影响

3.4讨论

第4章总结

4.1总结

4.2创新

展 望

附 录

参考文献

致谢

在学期间主要科研成果