小麦尿卟啉原Ⅲ合酶基因克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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第一章文献综述

1.1小麦返白系研究进展

1.1.1小麦返白系的形态特征及遗传特性

1.1.2返白期间叶绿体超微结构的变化

1.1.3返白期间的蛋白、核酸代谢的变化

1.1.4返白期间的色素代谢变化

1.2高等植物叶绿素的生物合成途径

1.2.1四吡咯色素前体——ALA的生物合成

1.2.2卟啉的合成

1.2.3原叶绿素酸酯(protochlorophyllide,Pchlide)的生成

1.2.4叶绿素的生成

1.3尿卟啉原Ⅲ合酶研究进展

1.4基因克隆技术概述

1.4.1序列克隆——根据已知基因的序列克隆植物基因

1.4.2人工合成并克隆基因

1.4.3功能克隆

1.4.4定位克隆

1.4.5表型克隆

1.4.6应用DNA芯片技术筛选新基因

1.5外源蛋白在大肠杆菌中的表达

1.5.1包涵体表达

1.5.2融合表达

1.5.3分泌型表达

1.6本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1植物材料

2.1.2载体和菌株

2.1.3主要试剂

2.1.4主要仪器

2.2实验方法

2.2.1 CTAB法提取DNA

2.2.2小麦总RNA提取

2.2.3引物设计

2.2.4 RT-PCR

2.2.5 PCR扩增

2.2.6 UROS基因全长编码区的PCR扩增

2.2.7 PCR产物的克隆

2.2.8原核表达

第三章结果分析及讨论

3.1结果及分析

3.1.1序列信息的获得

3.1.2序列同源性分析

3.1.3小麦基因组DNA及总RNA的提取

3.1.4 UROS基因部分片段的PCR扩增

3.1.5 PCR产物的克隆

3.1.6测序结果

3.1.7电子克隆

3.1.8小麦UROS基因的克隆

3.1.9序列分析

3.1.10表达载体构建

3.1.11小麦UROS基因在BL21(DE3)Codon plys中的表达

3.2 讨论

3.2.1关于实验方法和问题的探讨

3.2.2稀有密码子对外源蛋白表达的影响

3.2.3关于尿卟啉原Ⅲ合成酶

3.2.4展望

第四章结论及创新点

4.1结论

4.2创新点

参考文献

致谢

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