内容摘要
第一章串联亲和纯化研究蛋白质相互作用概述
1.1前言
1.2研究蛋白质相互作用的主要方法
1.3串联亲和纯化及其发展应用
1.3.1串联亲和纯化的原
1.3.2串联亲和纯化的方法
1.3.3TAP标签与TAP分离方法的发展
1.3.4TAP分离方法的特点
1.3.5串联亲和纯化在酵母蛋白质组学中的应用
1.3.6串联亲和纯化在研究高等真核生物蛋白质相互作用中的发展与应用
1.3.7串联亲和纯化在研究其他生物的蛋白质相互作用中的应用
1.4研究蛋白质复合体及蛋白质相互作用的意义
1.5氨基酸同位素代谢标记及其在蛋白质组学中的应用
1.6本文工作简介
第二章串联亲和纯化法分离纯化肝癌细胞中蛋白质复合物
2.1前言
2.2材料与方法
2.3结果
2.3.1RNA抽提
2.3.2RT-PCR与重组质粒的筛选
2.3.3转染与筛选条件的确定
2.3.4融合蛋白质的表达与稳定转染细胞株的建立
2.3.5蛋白质复合物的纯化
2.3.6蛋白质的质谱鉴定
2.4讨论
第三章氨基酸代谢标记的串联亲和纯化—质谱新技术(AACT-TAP-MS)研究蛋白质相互作用
3.1氨基酸代谢标记及其在分析蛋白—蛋白相互作用中的应用
3.2材料与方法
3.3结果
3.3.1Leu-d3标记测定
3.3.2Anti-Flagbeads分离蛋白复合体
3.3.3蛋白质的质谱鉴定
3.4讨论
第四章基于氨基酸代谢标记的免疫共沉淀新方法分离鉴定蛋白质复合物
4.1前言
4.2材料与方法
4.3结果与讨论
4.3.1SDS-PAGE
4.3.2蛋白鉴定
4.3.3讨论
参考文献
致谢
博士后期间发表的论文及申请专利
参加国际、国内学术会议及所做学术报告