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醌氧化还原酶NQO1对多巴胺细胞的保护作用及其对帕金森氏病防治作用的研究

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目的：研究多巴胺(Dopa mine，DA.)对多巴胺能细胞的增殖影响，醌氧化还原酶(Quinone oxidoreductase，NQO1)与多巴胺在细胞内代谢的关系，从而进一步寻求帕金森病发病的相关机理与治疗方法。
　　 方法：运用免疫荧光方法检测神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内酪氨酸氢化酶(Tyrosinehydrogenase，TH)、囊泡单胺类转运体(Vesicular mona mine transporter2，VMAT2)的表达；运用单核细胞直接细胞毒性测定(mono-nuclear cell direct cytotoxicity assay，MTT)方法检测多巴胺对(SH-SY5Y)神经母细胞瘤细胞的增殖影响，以及不同诱导剂对细胞的诱导保护作用；运用荧光定量PCR(Real Time-PCR)和蛋白质印迹(Western Blot)方法检测萝卜硫素(Sulforaphane，SF)作用于细胞后，细胞内NQO1的表达变化情况；并通过醌蛋白检测方法(氯化硝基四氮唑蓝NBT/甘氨酸法)检测SF和DA作用于细胞后细胞内的醌化蛋白含量变化；运用脂质体转染的方法进行细胞转染，并通过免疫荧光、Western Blot和Real Time-PCR方法检测转染效率；运用MTT和流式细胞术方法检测转染NQO1质粒后，多巴胺、6-羟多巴胺(6-OHDA)和鱼藤酮(Rotenone)对细胞的增殖影响，及NQO1抑制剂作用于细胞后DA对细胞的毒性影响；运用NBT方法检测细胞转染NQO1质粒后胞内醌化蛋白含量的变化；运用腺病毒感染方法感染不同的细胞系，并通过Western Blot检测感染后细胞内NQO1的表达变化；运用MTT方法检测腺病毒感染SH-SY5Y细胞后，DA对细胞的毒性影响；运用免疫荧光方法检测SF预处理和腺病毒感染原代细胞后，DA对TH神经元的毒性影响；运用免疫组织化学方法检测大鼠中脑切片中NQO1的表达变化，并通过Western Blot和Real Time-PCR方法检测不同脑区NQO1的表达量变化。
　　 结果：DA随浓度增大对SH-SY5Y细胞的毒性增强；不同Ⅱ相酶诱导剂中，SF在比较低的浓度下具有较好的诱导效果；SF作用于SH-SY5Y细胞后可以提高细胞内NQO1的表达，从而缓解DA对细胞造成的毒性影响；SF诱导细胞后，减少了DA引起的细胞内醌化蛋白的含量；脂质体转染NQO1质粒可以使SH-SY5Y细胞内NQO1表达量提高，NQO1过表达能够缓解多巴胺对细胞造成的毒性；转染NQO1质粒使细胞内NQO1高表达后减少了DA引起的细胞内醌化蛋白含量；细胞内NQO1高表达后也可缓解6-OHDA、Rotenone对细胞的毒性影响；NQO1抑制剂作用于SH-SY5Y细胞后，DA对细胞的毒性影响增强；NQO1高表达的腺病毒感染SH-SY5Y细胞后，细胞内NQO1表达量提高，缓解了DA对细胞的毒性影响；SF预处理胎鼠中脑原代细胞后，对DA造成的毒性影响有一定的改善；NQO1高表达的腺病毒感染胎鼠中脑原代细胞，缓解了DA对细胞的毒性影响；大鼠腹腔注射SF后，在皮层、中脑、尾状核部位NQO1表达量提高。
　　 结论：DA对SH-SY5Y细胞具有剂量依赖性的毒性影响，SF诱导、脂质体转染和腺病毒感染方法均能使SH-SY5Y细胞内NQO1表达量提高，细胞内NQO1过表达可以减轻DA等神经性药物对细胞的毒性作用，并且减少细胞内醌化蛋白的含量。腺病毒感染胎鼠中脑原代细胞后，可以缓解DA对多巴胺神经元的毒性损伤。大鼠腹腔注射SF后，大鼠的皮层、中脑、尾状核内部位NQO1表达量提高。

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