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大口黑鲈北方亚种与佛罗里达亚种杂交研究

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第一章 文献综述

1 前言

2 大口黑鲈生物学特征研究

3 鱼类近缘杂交育种研究进展

4 DNA 分子标记

5 论文的研究背景、目的意义和技术路线

第二章 大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及其杂交子代幼鱼的耐低温限度、耗氧率和窒息点研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第三章 大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及其杂交子代的生长和形态差异分析

1 材料与方法

2 研究结果

3 讨论

第四章 大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种及其杂交子代的微卫星分析

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

总 结

参考文献

附录一 中英文对照缩略词表(Abbreviations)

附录二 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢

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摘要

大口黑鲈(Micropterus salmoides),俗名加州鲈,隶属鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Porcoidei)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属(Micropterus),原产于北美淡水河流、湖泊,是当地一种重要的养殖与游钓鱼类。在天然水域中广泛分布着两个亚种:一种是分布在美国中东部、墨西哥东北部和加拿大东南部的大口黑鲈北方亚种(M. salmoides salmoides);另一种是分布在佛罗里达州南部的大口黑鲈佛罗里达亚种(M. salmoides floridanus)。20世纪70年代末中国台湾从国外引进大口黑鲈北方亚种,并于1983年人工繁殖获得成功,同年大口黑鲈北方亚种引入广东省,现已推广到全国各地,成为国内重要的淡水养殖品种之一。经过20多年的发展,养殖大口黑鲈出现了生产性能及抗逆性下降等问题,制约了大口黑鲈产业的发展。因此,培育养殖性能更加优异的大口黑鲈养殖新品种对大口黑鲈产业有着极为重要的意义。杂交作为鱼类育种的重要手段,能有效转移亲本的优良性状和增加后代的遗传变异,目前已在水产动物品种改良和生产中发挥了巨大的作用。本研究对大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种进行杂交试验,探讨杂交后代与亲代的生长、耐低温性能、耗氧率和窒息点差异,同时利用多元分析方法和微卫星标记技术分别对大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及其杂交子代的形态特征和遗传结构进行了探讨,以期为大口黑鲈杂交育种提供基础资料。
  具体研究内容如下:
  1、生长对比试验仅在北方亚种和两个杂交子代群体中进行。生长对比试验时间为174天,在90-152日龄期间3个试验群体生长速率差别不大,在152日龄后大口黑鲈北方亚种的生长速度明显快于两杂交子代,且3个群体均在189-264日龄期间生长速度最快。
  2、耐低温限度、耗氧率和窒息点研究。对大口黑鲈北方亚种(N)、佛罗里达亚种(F)及其正交子代(N♀×F♂)和反交子代(F♀×N♂)代幼鱼的耐低温限度、耗氧率和窒息点进行了测定。结果表明:在驯化温度为20℃,降温速率为2 h/℃时,北方亚种的半致死低温最低为3.1±0.17℃,佛罗里达亚种为5.05±0.21℃,正、反交子代介于两亲代群体之间,分别为4.8±0.06℃和4.2±0.17℃,对4种鱼的半致死低温进行单因素方差分析,显示4种大口黑鲈的半致死低温具有显著性差异(P<0.05)。采用封闭式流水装置测定大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及正反交子代的昼夜平均耗氧率,结果分别为0.1368 mg/g.h、0.1811 mg/g.h、0.1681mg/g.h和0.1388mg/g.h,4个群体的昼夜平均耗氧率差异不明显。窒息点测定显示佛罗里达亚种的窒息点最高为0.4mg/L,北方亚种的最低为0.33mg/L,但4个群体在窒息点上差异不显著(P>0.05)。
  3、形态差异分析。将传统形态学可量、可数性状和框架结构参数相结合,利用多元分析方法对大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及其杂交子代的形态差异进行了利用可数性状的分析。结果表明,4个试验组在腹鳍、臀鳍硬棘、鳃鲃和脊椎骨上均无差异;正反交子代与两亲本在背鳍条、胸鳍条、臀鳍条、尾鳍条、侧线上、下鳞的数量上的差异均达到极显著差异(P<0.01)。可量性状和框架结构数据的聚类分析结果表明,北方亚种和佛罗里达亚种聚为一支,正交子代(N♀×F♂)和反交子代(F♀×N♂)聚为一支,然后这两支再汇聚;主成分分析概括出方差贡献率较大的6个主成分,累积贡献率为82.97%,主成分1主要反映鱼体框架的变化,方差贡献率为54.9%,主成分2和主成分3主要反映鱼的头部、背部和尾部的形态变化,方差贡献率分别为11.21%和5.33%。在35个测量参数中挑选11个对判别贡献较大的参数建立4个群体的判别函数,判别准确率83.9%~100%。
  4、遗传结构分析。用18对微卫星引物对大口黑鲈(Micropterus salmoides)北方亚种(N)、佛罗里达亚种(F)及其正交子代(N♀×F♂)和反交子代(F♀×N♂)进行遗传多样性和遗传结构分析。结果表明,18对引物扩增出的等位基因数分别为2~8个,平均等位基因数为5.0。检测到6对(Jzl48、Jzl68、Jzl84、MiSaTPW76、Msal21、Mdo6和Mdo7)亚种间特异性引物,其中有2对引物(Jzl48和Mdo7)可以用来鉴别大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种和其杂交子代。平均有效等位基因数、平均期望杂合度和平均多态信息含量均为杂交组合 F♀×N♂最高,分别为3.1997,0.6389和0.5706,平均观测杂合度为杂交组合 N♀×F♂最高(0.8488)。对亲代与杂交子代间的遗传分化分析表明,正反交子代均与北方亚种的遗传分化最小(0.092和0.1196)。基于Nei’s遗传距离构建的UPGMA系统进化树显示正交子代 N♀×F♂与母本 N聚为一支,反交子代 F♀×N♂与父本 N聚为一支。

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