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【6h】

RNAi沉默APE1/Ref-1增强吉西他滨对胰腺癌细胞SW1990化疗敏感性的体内外研究

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目的：①探讨以APE1/Ref-1为靶点的基因治疗在胰腺癌治疗及其对吉西他滨化疗増敏的作用及临床应用前景；②探讨慢病毒载体在胰腺癌基因治疗中的临床应用前景； 方法：⑴化学合成靶向抑制APE1/Ref-1的siRNA片段，采用脂质体转染技术转染胰腺癌细胞SW1990，半定量RT-PCR和western blot检测染前后SW1990细胞APE1/Ref-1基因表达情况的变化；采用CCK-8检测其对SW1990细胞的增殖作用;采用流式细胞术和Hochest33258染色检测其诱导SW1990细胞凋亡及对化疗的増敏作用；⑵构建靶向APE1/Ref-1的慢病毒载体，并建立裸鼠皮下胰腺癌移植瘤模型，用携带APE1/Ref-1基因的慢病毒上清瘤内注射和吉西他滨腹腔内注射联合治疗，观察裸鼠肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率，并用免疫组织化学方法检测肿瘤组织APE1/Ref-1蛋白表达情况。 结果：体外实验中，RNA干扰APE1/Ref-1基因能够降低mRNA和蛋白的表达，对蛋白的抑制率为（55.41±3.58）％，可抑制SW1990细胞增殖，干扰24h、48h和72h抑制率分别为（41.69±2.78）％、（24.83±3.70）％、（21.27±9.82）％；流式检测测细胞凋亡，较对照组，吉西他滨组、si-APE1组和联合组均可见明显凋亡的凋亡，早期凋亡率分别为（2.73±1.41）％、（7.7±1.14）％、（8.37±0.98）％、（19.8±3.47）％，Hochest染色可见联合组有明显的凋亡核形态学变化。体内试验中，慢病毒载体介导的RNA干扰沉默APE1/Ref-1基因，联合治疗组和对照组、吉西他滨组、RNA干扰单用组肿瘤大小间存在明显差异，与对照组相比，RNA干扰组、吉西他滨组、联合组抑瘤率分别为22.56％、50.91％、66.37％，免疫组化检测发现慢病毒介导的RNA干扰能够成功沉默APE1/Ref-1基因。 结论：①RNA干扰沉默APE1/Ref-1基因能够在体内外抑制胰腺癌SW1990的生长；②慢病毒载体pGCL-GFP-U6-APE1 siRNA可特异性地沉默胰腺癌SW1990细胞表达；③RNA干扰沉默APE1/Ref-1基因能够增强吉西他滨对胰腺癌的化疗作用；④慢病毒与吉西他滨联合治疗胰腺癌，可以作为肿瘤基因治疗的载体。

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