大豆天隆一号突变体库及CRISPR/Cas9技术平台的初步构建

声明

摘要

第1章绪论

1．1植物突变体库研究进展

1．1．1自发突变

1．1．2物理辐射诱变

1．1．3化学试剂诱变

1．1．4生物学技术诱变

1．2大豆突变体库研究进展

1．2．1大豆理化诱变研究进展

1．2．2 CRISPR／Cas9技术在大豆基因敲除中的研究进展

1．2．3大豆转基因技术的进展

1．2．4植物花形态发育研究进展

1．3本课题的研究内容和意义

第2章大豆突变体库的构建

2．1材料与试剂

2．1．1植物材料

2．1．2实验试剂

2．1．3实验耗材和仪器

2．1．4实验溶液的配置

2．2实验方法

2．2．1诱变处理

2．2．2播种与收获

2．2．3表型调查

2．2．4 SSR分子检测

2．2．5 RT-qPCR基因表达分析

2．3结果与分析

2．3．1诱变效应分析

2．3．2性状分析

2．3．3突变体的SSR分子标记检测

2．3．4 RT-qPCR分析

2．4讨论

第3章CRISPR／Cas9技术平台的构建

3．1材料与方法

3．1．1植物材料

3．1．2菌株和质粒

3．1．3实验试剂

3．1．4培养基和培养液配方

3．1．5实验耗材和仪器

3．1．6 PCR扩增所用的引物列表

3．2实验方法

3．2．1构建载体

3．2．2载体的转化

3．2．3农杆菌介导的大豆子叶节转化

3．2．4发根农杆菌K599诱导毛状根

3．3结果与分析

3．3．1靶点的选择

3．3．2重组质粒转化农杆菌的鉴定

3．3．3发根农杆菌诱导“天隆1号”大豆发状根的检测

3．3．4根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化

3．3．5小结与讨论

第4章结论

第5章创新点和展望

5．1本研究的创新点

5．2展望

参考文献

附录

攻读学位期间取得的研究成果

致谢