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宝钢废气生物处理塔中微生物群落的分子生态学研究

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第1章综述

1.1分子生态技术在环境微生物分析中的应用与研究进展

1.1.1用于环境微生物的分子生态技术

1.1.2电泳分离及显示方法

1.1.3分子生态学技术在环境污染治理研究中的应用

1.2生物信息学的概念和研究内容

1.2.1生物信息学的概念

1.2.2生物信息学研究的内容

第2章研究目的、意义和内容

2.1研究目的和意义

2.2研究内容和技术路线

2.2.1研究内容

2.2.2研究的技术路线

2.3研究方法和仪器

第3章样品总DNA的提取方法

3.1引言

3.2宝钢样品总DNA的抽提方法研究

3.2.1实验材料和方法

3.2.2总DNA样品的常规电泳检验

3.2.3 16S rDNA特定片段的扩增

3.2.4 PCR扩增产物的DGGE分离

3.2.5结论

3.2.6其他样品的分析结果

3.3本章小结

第4章样品的PCR扩增

4.1概述

4.2 PCR原理

4.3 PCR的影响条件及优化

4.3.1模板核酸

4.3.2引物

4.3.3缓冲液

4.3.4 Mg2+

4.3.5三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)

4.3.6耐热DNA聚合酶

4.3.7温度循环参数

4.3.8其它因素

4.3.9平台效应(plateau effect)

4.3.10忠实性

4.4 PCR污染的对策[41,42,43]

4.4.1污染的预防

4.4.2污染源的追踪

4.4.3污染的处理

4.5 PCR实验的操作与结果分析

4.5.1实验材料

4.5.2实验步骤和方法

4.5.3实验结果

4.5.4结果讨论

4.6本章小结

第5章样品的DGGE分析

5.1引言

5.2 DGGE原理

5.3 DGGE实验和结果分析

5.3.1实验材料

5.3.2实验方法

5.3.3实验结果分析

5.4本章小结

第6章测序结果的生物信息学分析

6.1引言

6.2生物信息学分析

6.2.1测序结果

6.2.2基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析

6.2.3核酸序列之间的多重比对分析及系统进化关系分析

6.3本章小结

第7章结论和建议

7.1结论

7.2建议

参考文献

致 谢

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摘要

随着环境科学的发展,对环境微生物群落的分析越来越重要.由于传统的基于培养的微生物分析方法存在缺陷,不能满足环境分析的要求;近年来发展起来的分子生态技术可以较好的解决传统方法的缺陷.该研究利用分子生态学技术分析了宝钢废气生物处理塔中微生物群落的生物多样性和部分微生物的系统进化关系.通过实验得到的主要研究结论如下:1.通过三种总DNA提取方法的对比,确定了一种操作简便、不需要购置专用设备的总DNA提取的化学方法;并用此方法提取了苯塔、酚塔和吡啶塔样品的总DNA,所得总DNA可以满足环境微生物群落分析的要求.2.根据PCR原理和样品的特点,探讨得出了合适的PCR反应体系和反应程序;运用此条件对宝钢废气生物处理塔中的样品进行了PCR扩增,所有样品都得到了250bp左右的特定DNA片段,此结果的片段大小和实验设计结果相吻合;此条件PCR扩增的产量能够满足DGGE分析的要求;实验中还解决了PCR扩增污染的问题.3.利用DGGE分离技术,对PCR扩增得到的各样品的特定DNA片段进行了分离,在各个样品中都可以分离出三十条以上的单一条带,初步得出了生物塔中的微生物群落的生物多样性和微生物的大致数量比例关系;通过同一生物塔中不同位置和不同时间的微生物群落的变化情况初步分析了外界条件对微生物群落结构的影响.4.对DGGE分离的部分单一DNA条带进行了测序,利用Blast软件对测序结果在GenBank数据库中进行了同源性对比,所得结果大部分为不可培养微生物,这是传统方法分离不到的微生物;利用BioEdit软件对各生物塔测序条带进行了进化系统分析,画出了无根进化树,得到了它们之间的系统进化关系.

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