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精胺对鹅卵巢多胺代谢、抗氧化酶活性及激素受体基因表达的影响

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1 文献综述

1.1 多胺概述

1.2多胺调控动物繁殖的功能

1.2.1 多胺调控动物卵巢发育和卵泡成熟

1.2.2 多胺与繁殖激素共同参与调控动物繁殖功能

1.2.3 多胺具有抗氧化应激的功能

1.3精胺代谢及其调控动物繁殖和抗氧化的功能

1.3.1精胺的生物合成和分解代谢

1.3.2精胺调控动物繁殖的功能

1.3.3精胺的抗氧化功能

1.4多胺的检测方法

1.4.1HPLC样品预处理

1.4.2 HPLC检测条件

1.5本试验的目的与意义

2材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1试验动物及样品采集

2.1.2主要仪器设备

2.1.3主要试剂及试剂盒

2.1.4试剂配制

2.2试验方法

2.2.1 多胺含量检测

2.2.2卵巢指数

2.2.3卵巢组织形态学检测

2.2.4实时荧光定量PCR

2.2.5 卵巢抗氧化酶活性检测

2.2.6血清激素检测

2.2.7数据处理与统计分析

3结果与分析

3.1 多胺检测条件筛选及方法优化

3.1.1多胺标准曲线

3.1.2多胺检测的回收率

3.1.3 多胺检测的日内、日间及批间差异

3.1.4优化后的多胺检测方法的精密度

3.1.5鹅组织中的多胺含量

3.2精胺对鹅采食量和体增重的影响

3.3精胺对鹅繁殖功能的影响

3.3.2精胺对鹅卵巢多胺代谢关键基因表达的影响

3.3.3精胺对鹅卵巢多胺含量的影响

3.3.4精胺对鹅卵巢繁殖激素受体基因表达的影响

3.3.5精胺对鹅血清激素水平的影响

3.4精胺对鹅卵巢抗氧化功能的影响

4讨论

4.1 多胺检测方法的优化

4.2鹅不同组织中的多胺含量

4.3精胺对鹅卵巢繁殖功能的影响

4.3.1 精胺对鹅卵巢多胺代谢的影响

4.3.2精胺对鹅繁殖激素水平及其卵巢受体基因表达的影响

4.4精胺对鹅卵巢抗氧化功能的影响

5结论

参考文献

致谢

作者简历

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摘要

精胺是多胺生物合成的终产物,能通过促进雌性动物卵巢和卵泡发育,与繁殖激素发生互作参与调控卵巢功能,改善抗氧化。干扰和过表达鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Ornithine decarboxylase antizyme1,OAZ1)发现鹅颗粒细胞精胺含量,黄体生成素受体(Luteinizing hormone receptor,Lhr)和雌二醇受体(Estradiol receptor,Er)基因表达以及培养基中E2水平均发生变化,提示精胺与激素及其受体基因之间可能存在相互联系。精胺的抗氧化能力强于腐胺和亚精胺,不仅能清除活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS),还能通过提高超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH)合成,介导内源性抗氧化酶系统发挥抗氧化功能。因此,精胺不仅与繁殖激素之间存在相互调控关系,还能参与调节机体的抗氧化能力,然而,尚未见精胺调节禽类繁殖激素及其受体基因、卵巢抗氧化功能的报道。因此,本研究采用优化多胺的高效液相色谱检测方法检测鹅不同组织腐胺、亚精胺和精胺含量,阐明鹅组织中多胺含量分布;采用5和10mg/kg精胺灌喂170±5日龄的成年产蛋前期四川白鹅母鹅,研究精胺对鹅繁殖功能和卵巢抗氧化功能的影响。
  结果表明:(1)鹅卵巢组织中腐胺含量显著高于其他组织(p<0.05),胸肌组织中腐胺含量最低;脾脏组织中亚精胺含量显著显著高于其他组织(p<0.05),腿肌组织中亚精胺含量最低;肺脏组织中精胺含量最高,显著高于大脑、小脑、心脏、肝脏、肾脏、腺胃、十二指肠、胸肌、腿肌和卵巢组织(p<0.05),腿肌组织中精胺含量最低。
  (2)外源性精胺灌喂产蛋前期母鹅2周后,卵巢指数和卵巢形态均无显著变化(p>0.05)。
  (3)5和10mg/kg精胺组卵巢Azin1、Samdc和Apao基因表达量均显著升高(p<0.05),Azin2、Oaz1、Odc、Spds和Spms基因表达量均显著降低(p<0.05),而对Oaz2、Smo和Ssat基因表达量无显著影响(p>0.05);仅10mg/kg精胺处理后卵巢组织中亚精胺含量显著升高(p<0.05),腐胺和精胺含量均无显著变化(p>0.05),而5mg/kg精胺对卵巢组织腐胺、亚精胺和精胺含量无显著影响(p>0.05)。
  (4)5mg/kg精胺组卵巢组织中Fshr、Lhr和Er2基因表达量均显著降低,分别是对照组的0.46、0.47和0.47倍(p<0.05);而10mg/kg精胺组卵巢组织中Fshr、Lhr、Er1、Er2和Pr基因表达量均显著降低,分别是对照组的0.37、0.20、0.31、0.62和0.39倍(p<0.05);仅10mg/kg精胺组鹅血清P4水平显著降低,是对照组的0.91倍(p<0.05),而外源性精胺对FSH、LH和E2激素水平均无显著影响(p>0.05)。
  (5)10mg/kg精胺处理组卵巢SOD和CAT活性显著升高,分别是对照组的1.18和1.49倍(p<0.05)。
  结论:(1)通过萃取纯化过程的优化,使多胺检测周期缩短为9min,提高了准确性和精确性。(2)鹅多胺含量呈组织特异性分布,填补了产蛋前期成年四川白鹅组织多胺含量数据的空白。(3)外源性精胺可通过介导鹅卵巢组织多胺代谢关键酶基因表达来参与维持卵巢组织的多胺稳态。(4)外源性精胺能通过下调卵巢组织Fshr、Lhr、Er1、Er2和Pr基因表达以及血清P4水平来参与调控鹅繁殖功能。(5)外源性精胺可通过上调SOD和CAT活性提高鹅卵巢抗氧化功能。

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