四川地区1株虹鳟(Oncorhynchus mykiss)源传染性造血器官坏死病毒的分离鉴定

声明

摘要

1 文献综述

1．1 IHNV概述

1．1．1 IHNV的分布与危害

1．1．2 IHNV分类地位与生物学特征

1．1．3 IHNV基因组及编码的蛋白质特征

1．1．3 IHNV基因分型

1．1．4 IHNV流行特点

1．1．5 IHNV感染的症状与病理学变化

1．1．6 IHNV的诊断与防治

1．2 虹鳟病害研究概况

1．1．1 虹鳟养殖现状

1．1．2 虹鳟病毒性疾病

2 材料

2．1 实验动物

2．2 实验材料

2．3 主要试剂配制方法

3 方法

3．1 病原检测

3．1．1 寄生虫学检查

3．1．2 细菌学检查

3．1．3 病毒学检查

3．2 自然感染虹鳟的病理组织学检查

3．2．1 取材

3．2．2 石蜡切片制备

3．2．3 HE染色和读片

3．3 传染性造血器官坏死病毒的分离及鉴定

3．3．1 组织悬液的制备

3．3．2 鲤鱼上皮瘤细胞传代培养

3．3．3 组织悬液接种到EPC细胞单层

3．3．4 病毒液RT-PCR鉴定

3．4 回归试验

3．5 IHNV糖蛋与核蛋白基因的克隆及系统进化分析

3．5．1 引物设计及合成

3．5．2 RT-PCR扩增糖蛋白和核蛋白基因

3．5．3 扩增产物的克隆与序列测定

3．5．4 基因序列测定

3．5．4 糖蛋白基因系统进化分析和同源性比较

3．6 核蛋白基因生物信息学分析

4 结果

4．1 病原检测

4．1．1 寄生虫学检查

4．1．2 细菌学检查

4．1．3 病毒学检查

4．2 自然感染虹鳟的病理组织学检查

4．2．1 临床症状观察

4．2．2 组织病理学观察

4．3 病毒的分离及鉴定结果

4．3．1 病毒的分离

4．3．2 病毒液RT-PCR检测结果

4．4 回归试验

4．5 IHNV主要功能基因的克隆及系统发育分析

4．5．1 G和N基因的扩增、T-克隆与鉴定

4．5．2 “Mid-G”基因的系统发育和同源性分析

4．6 核衣壳蛋白基因生物信息学分析

4．6．1 氨基酸序列理化特性分析

4．6．2 保守结构域分析

4．6．3 信号肽分析

4．6．4 跨膜区域分析

4．6．5 疏水性分析

4．6．6 抗原表位分析

4．6．7 糖基化及磷酸化位点的预测

4．6．8 系统发育和同源性分析

5 讨论

5．1 IHNV的诊断

5．2 IHNV感染的病理损伤

5．3 IHNV的系统发育分析

5．4 IHNV N蛋白基因生物信息学分析

6 结论

参考文献

致谢

作者攻读硕士学位期间发表的学术论文