猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)三聚体自转运粘附素肺组织互作蛋白筛选研究

声明

摘要

符号说明

1 猪传染性胸膜肺炎防线杆菌概述

1．1 猪传染性胸膜肺炎防线杆菌病原学

1．2 胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子研究进展

2 三聚体自转运粘附素研究进展

2．1 三聚体自转运粘附素的结构

2．2 三聚体自转运粘附素的分泌

2．3 三聚体自转运粘附素的功能

研究目的及意义

第一章 Adh诱饵质粒的构建及检测

1 试验材料

1．1 主要仪器

1．2 主要试剂

2 方法

2．1 酵母双杂交Adh诱饵质粒构建

3 结果

3．1 adh基因的扩增

3．2 Adh基因回收鉴定

3．3 重组质粒pMD19T-Adh的鉴定

3．4 重组质粒PGBKT7-Adh的鉴定

3．5 酵母菌株AH109营养表型的验证

3．6 诱饵质粒PGBKT7-Adh转化AH109感受态细胞鉴定

3．7 PGBKT7-Adh转化AH109后的自激活、毒性检测及缺陷培养基生长实验

4 讨论分析

5 小结

第二章 肺组织大肠杆菌文库及酵母文库质量检测

1 材料

1．1 主要仪器

1．2 主要试剂

2 方法

2．1 设计检测文库引物

2．2 肺组织文库(大肠杆菌)质量检测

2．3 肺组织文库(酵母菌)质量检测

3 结果

3．1 肺组织文库(大肠杆菌)质量大小鉴定

3．2 肺组织文库(大肠杆菌)容量鉴定

3．3 对肺组织文库(酵母菌)进行滴度测定

3．4 对肺组织文库(酵母菌)进行PCR随机检测

4 讨论分析

5 小结

第三章 APP Adh肺组织互作蛋白筛选

1 材料

1．1 主要仪器

1．2 主要试剂

2 方法

2．1 试验原理

2．2 试验方案

2．3 酵母双杂交诱饵准备

2．4 酵母双杂交文库质粒共转化入诱饵感受态

2．5 酵母质粒的营救

2．6 酵母质粒与诱饵质粒回转验证

2．7 酵母质粒的鉴定

2．8 生物信息学在线分析网站

2．9 预测相互作用位点

2．10 蛋白质功能分析

2．11 预测诱饵其他未知功能

3 结果

3．1 酵母双杂交诱饵准备

3．2 酵母双杂交阳性克隆子的鉴定

3．3 氨基酸序列分析

3．4 跨膜区分析

3．5 亲疏水性分析

3．6 信号肽分析

3．7 二级结构分析

3．8 功能区分析

3．9 诱饵蛋白其他未知功能预测

4 讨论分析

4．1 酵母双杂交

4．2 锌指蛋白的结构功能

4．3 Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶的结构功能

4．4 HLA-Ⅱ类分子的调节分子的结构功能

4．5 支链氨基酸转氨酶的结构功能

5 小结

结论

参考文献

致谢

附录