猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建

刘琼; 龚雨恒; 王国镔; 文心田; 黄小波; 曹三杰

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猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)以及副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是引起猪发病的2种病菌.本研究以APP血清5型分离株(SW1)为基础材料,通过构建重组转移载体pBOSK△IC-1和pBOSK△IC/ompP2,构成卡那霉素抗性基因(Kanr)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的果聚蔗糖酶基因(sacB)的正负双向筛选表达盒,并筛选获得SW1株缺失毒素Ⅰ的激活基因C(Apx(I)C),同时嵌合Hps外膜蛋白P2基因(ompP2)的复合突变株SW1 △ApxIC/ompP2.该突变株经鉴定,与SW1亲本株相比,其缺失了大小为475 bp的apxIC基因,同时嵌合有大小为1 107bp的Hps ompP2基因,其基本生长特性与亲本株(SW1)没有显著区别;同时在体外,连续传代10代之后缺失的apxIC基因不会发生回复突变,嵌入的ompP2基因仍能够稳定遗传.本研究成功构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失apxIC基因并嵌合有Hps ompP2基因复合突变株,为今后研究APP和Hps新型二联疫苗打下基础.%Actinobacillus pkuropnewnoniae (APP) and Haemophilus parasuis (Hps) are the bacteria of causing porcine disease. In this study, We constructed two recombinant vectores pBOSKA/C-1 and pBOSKAIC/ompP2 using APP5 (SW1) strain as a template, and the two recombinant vectores were used for plus-minus screening system with the basis of Kanr and sacB. The mutant strain, named SW1 A apxICIompP2, was obtained, which was deleted toxin I gene C (apxIC) in SW1 and gotnphosised outer membrane protein P2 Hps gene {ompPZ). The mutant missed a size of 475 bp apxIC gene but was inserted a size of 1107 bp Hps ompP2 gene compared with the parental strain SW1. No reverse mutation of apxlC gene was observed during after 10 generations, while Hps ompP2 gene still had a good genetic stability in vitro, the mutant strain had no significant difference of he basic growth characteristics with the parental strain (SW1). The results confirmed that an apxlC mutant of A. pkuropneumoniae gomphosised ompP2 gene of H. parasvis was successfully constructed, and it offered a foundation for developing a new bivalent vaccine of APP and Hps.

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来源
《农业生物技术学报》 |2012年第6期|695-702|共8页
作者
刘琼; 龚雨恒; 王国镔; 文心田; 黄小波; 曹三杰;
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作者单位

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室,成都611130;

农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站,雅安625014;

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室,成都611130;

农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站,雅安625014;

四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心,雅安625014;

四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室,成都611130;

农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站,雅安625014;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
胸膜肺炎放线杆菌(APP); 毒素IC基因(apxIC); 副猪嗜血杆菌(Hps); 外膜蛋白P2基因(ompP2); 复合突变株;

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