猪圆环病毒四川株分离鉴定及猪圆环病毒2型ORF2的克隆与序列分析

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该研究参照GenBank中猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)基因序列,设计一对特异性引物,建立了PCV的PCR-RFLP鉴别诊断方法.利用该方法从四川部分猪场采集的断乳猪多系统衰弱综合征(PMWS)的病料11个、猪皮炎-肾炎综合症(PDNS)病料1个中检测到阳性病料7个,检测阳性率为58.3﹪,说明该病在四川普遍存在,并通过NcoI酶切该片段成功鉴别出1个PCV-1和2个PCV-2阳性病料,并依次命名为PCV-1 SCHC株、PCV-2 SCH A和PCV-2 SCH B株;并用此方法对猪源细胞进行PCV检测,在IBRS-2细胞中鉴别诊断出PCV-1,并命名为SCH D株.对2个PCV-2检测阳性病料,利用无PCV的PK-15细胞进行增殖培养,经电镜检测,表明只有PCV-2 SCHA株增殖成功.参照GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的基因序列,设计一对PCV-2的ORF2特异性引物,从该室分离的PCV-2 SCHA株感染PK-15细胞中扩增出ORF2的基因(702bp).将此片段克隆在PMD18-T载体中,筛选获得重组质粒PDM18-ORF2,并对插入片段进行测序分析,表明PCV-2的ORF2的克隆成功.PCV-2的ORF2的克隆成功,为进一步的基因表达、诊断和重组疫苗以及PCV-1和PCV-2基因改造奠定了基础.通过多序列比对和遗传进化树分析,证实了PCV-2 SCHA株ORF2基因的变异范围.通过比对证实SCH A株的ORF2与中国HuNan株ORF2的同源性最高,可达到96﹪的核苷酸同源性,96﹪的氨基酸的同源性,进一步证实该序列为PCV-2 ORF2的基因.遗传进化树分析证实了PCV ORF2有两个不同的基因型存在:没有致病性的PCV-1 ORF2基因型和有致病性的PCV-2 ORF2基因型;在PCV-2 ORF2分支中,中国分离株之间ORF2变异较大,中国分离株的ORF2的亲缘关系较复杂.该文研究的数据说明尽管PCV-2 ORF2不同分离株之间基因型较稳定,但是不同的地域株之间有较大地变异,这种变异可能对PCV的诊断和研究有重要意义.通过SCHA株ORF2编码氨基酸的亲水性/疏水性分析,证实了ORF2的抗原表位的位置与Truong等证实的结果一致.

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作者
王新;
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作者单位

四川农业大学;

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授予单位四川农业大学;
学科预防兽医学
授予学位硕士
导师姓名郭万柱;
年度 2004
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类猪;
关键词
猪圆环病毒; 分离鉴定; ORF2; 序列分析;

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