汞转运蛋白的表达纯化、鉴定与结晶

声明

第1章 引言

1.1 细菌中的耐汞机制

1.1.1 耐汞机制的起源

1.2 Mer operon简介

1.2.1 Mer operon的关键组分及相关特性

1.2.2 Mer operon的调控机制及工作模型

1.2.3 Mer operon系统几种转运蛋白的研究现状

1.3 MerC蛋白的二级拓扑结构及功能研究

1.3.1 MerC蛋白的二级拓扑结构及生物学功能

1.3.2 MerC蛋白性质研究

1.4 本文的研究意义

第2章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 基因，菌种，质粒和工具酶

2.1.2 试剂与耗材

2.1.3实验设备与仪器

2.2 实验方法

2.2.1 LB（Luria-Bertani）液体培养基制备

2.2.2 LB（Luria-Bertani）固体培养基平板的制备

2.2.3 聚合酶链式反应

2.2.4 琼脂糖凝胶电泳

2.2.5 胶回收

2.2.6 目的片段酶切和载体的线性化

2.2.7 连接反应

2.2.8 感受态细胞的制备

2.2.9 连接产物转化感受态细胞

2.2.10 重组质粒的鉴定

2.2.11 质粒小量提取

2.2.12 MerC蛋白的表达及提取

2.2.13 蛋白质的纯化

2.2.14 SDS-PAGE凝胶电泳

2.2.15 蛋白质的结晶

2.2.16 晶体优化

2.2.17 分析超离心技术测定蛋白分子量

第3章 MerC蛋白的表达纯化、鉴定与结晶

3.1 MerC蛋白及截短体的初步表达纯化

3.1.1 膜蛋白重组表达体系简介

3.1.2不同菌种来源的MerC及MerC截短体的表达纯化对比

3.2 MerC蛋白表达条件的优化

3.2.1 温度对MerC蛋白表达的影响

3.2.2 菌株对MerC蛋白表达的影响

3.3 MerC蛋白结晶条件筛选及晶体优化

3.3.1 传统膜蛋白结晶方法

3.3.2 新型膜蛋白结晶方法

3.3.3 MerC蛋白结晶条件筛选

3.3.4 MerC蛋白晶体优化

3.4 MerC蛋白纯化过程去垢剂的筛选和置换

3.4.1 去垢剂在膜蛋白提取、纯化和结晶中的应用

3.4.2 MerC蛋白置换去垢剂

3.4.3 MerC蛋白置换去垢剂后结晶条件筛选及晶体优化

第4章 MerC蛋白在溶液中聚集状态的表征

4.1 M3蛋白浓度影响凝胶过滤层析的迁移率

4.2 MerC蛋白在溶液中的表现形态为二聚体

第5章 结果与讨论

参考文献

发表论文和参加科研情况的说明

致谢