• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文学位 >冻存对T细胞的影响及GPC3抗原表位肽对T细胞的诱导活化
【6h】

冻存对T细胞的影响及GPC3抗原表位肽对T细胞的诱导活化

代理获取
页面导航
  • 目录
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

目录

第一个书签之前

展开▼

摘要

研究目的: 1.建立一种能够在体外快速大量扩增T淋巴细胞的培养方法.2.评估冻存前T细胞状态对复苏后细胞增殖能力、表型和功能的影响.3.建立GPC3特异性T细胞,提高肝细胞癌(HCC)患者肿瘤过继性免疫治疗T细胞的杀瘤能力. 研究方法: 1.取HCC患者外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),设ALyS?培养技术为实验组:应用ALyS505N培养基,添加IL-2诱导;设传统培养方法为对照组:应用1640培养基,添加IFN-γ、IL-2及IL-1α三种细胞因子;观察不同时间点两组细胞形态、数目、细胞表型和杀伤效率.2.分离HCC患者PBMCs,按照培养不同阶段0,4,8,12天冻存细胞,保存2个月后复苏,台盼蓝检测细胞活性,MTS法检测细胞增殖能力,流式检测细胞表型,ELISPOT检测IFN-γ和IL-10的分泌.3.分离脐带血PBMCs,贴壁60-90分钟,取贴壁细胞制备DC,分别使用HepG2冻融抗原及GPC3表位抗原肽负载DC,TNF-α促进DC成熟,第8天收集.光镜观察细胞形态,流式细胞术检测DC表面抗原CD80、CD86、CD83表达.收集同份脐带血悬浮细胞,与第8天诱导成熟的不同组别DC共培养7天,收集细胞,流式细胞术检测T细胞亚群、Th细胞极化及CCR4、CCR5、CCR6、CXCR3和CXCR4趋化因子. 研究结果: 1.培养第18天后实验组细胞总数显著高于对照组(2-2.8倍)(P<0.05),两组中活细胞比例均高于95%.两组细胞CD25+比例均至第7天达峰值,且在培养至第7、14天,实验组显著高于对照组(P<0.05).流式细胞仪检测,两组中CD3+,CD8+,CD3+CD56+细胞比例均随培养时间延长而上升,实验组培养至18天达CD8+细胞比例(58.80±11.26)%,显著高于对照组(40.35±4.98)%,(P<0.05).实验组诱导T淋巴细胞对肿瘤细胞株SMMC-7721杀伤效率显著高于对照组,是对照组的1.6-2.6倍. 2.各组细胞经过2个月冻存后再次复苏均能够保持比较好细胞形态,各组冻存细胞活率均>90%.MTS法对复苏的各组细胞再次培养的增殖能力进行检测,发现4天(F/T)组,8天(F/T)组和12天(F/T)组OD值于复苏后继续培养24小时出现显著增加,而0天(F/T)组OD值复苏后72小时组出现显著增加.各组细胞培养14天成熟后,进行流式细胞仪检测,与新鲜培养成熟的T细胞相比,4天(F/T)组,8天(F/T)组和12天(F/T)组CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞比例无显著变化,而0天(F/T)组CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞比例发生变化,且具有统计学意义;0天(F/T),4天(F/T)和8天(F/T)组培养成熟后NKT细胞的比例显著下降,而12天(F/T)组无显著变化;0天(F/T)和4天(F/T)组对培养成熟后Treg细胞的比例显著升高,而8天(F/T)和12天(F/T)组无显著变化.ELISPOT结果显示冻存不会影响再次培养成熟的T细胞分泌IFN-γ的能力,而冻存后再次培养细胞中,8天(F/T)和12天(F/T)组T细胞分泌的IL-10显著下降. 3.观察到不同致敏方式均能诱导出具有典型形态的DC.流式细胞术检测,培养第7天的各组DC表面抗原CD83、CD80和CD86均有表达,符合分化成熟的DC标志;与未加入DC的T细胞组相比,致敏与未致敏DC均能在体外刺激CD8+T淋巴细胞比例升高,CD4+T淋巴细胞比例降低,但不同的致敏方式间CD8+T、CD4+T淋巴细胞比例无统计学差异;与未加入DC的T细胞组相比,GPC3表位抗原肽致敏DC诱导的T细胞中(DC-GPC3144-152-T组和DC-GPC3298-306-T组),Th1细胞占总CD4+T细胞的比例显著增加,而Th2细胞比例显著减少;与未加入DC的T细胞组相比,致敏与未致敏DC诱导的T细胞(DC-T组、DC-GPC3144-152-T组、DC-GPC3298-306-T组、DC-HepG2-T组)均能够提高CCR6、CXCR3的表达;与未致敏DC诱导的T细胞(DC-T组)相比,不同致敏方式(DC-GPC3144-152-T组、DC-GPC3298-306-T组、DC-HepG2-T组)均能诱导CCR6表达升高,GPC3298-306致敏DC诱导的T细胞(DC-GPC3298-306-T组)CCR5表达升高. 研究结论: 采用ALyS培养技术能够有效的扩增HCC患者的T淋巴细胞,增加其中效应T细胞数量.经过8和12天培养的T细胞冻存细胞复苏后再次培养即能恢复到与新鲜培养时的相同状态.GPC3表位抗原肽能够有效的致敏DC;与T细胞共培养时能够诱导培养的T淋巴细胞亚群中的CD8+T细胞比例升高,并能够有效的提高CCR6、CXCR3的表达.

著录项

  • 作者

    王鹏;

  • 作者单位

    天津医科大学;

  • 授予单位 天津医科大学;
  • 学科 生物学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 高英堂;
  • 年度 2017
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类
  • 关键词

    冻存; 细胞; GPC3; 抗原表位肽; 诱导;

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号