• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文学位 >Transthyretin蛋白酪氨酸硝基化参与FAP患者淀粉样变形成的分子机制研究
【6h】

Transthyretin蛋白酪氨酸硝基化参与FAP患者淀粉样变形成的分子机制研究

代理获取
页面导航
  • 目录
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、FAP患者组织淀粉样变沉积检测

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、TTR酪氨酸硝基化参与FAP淀粉样变形成机制初探

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:转甲状腺素蛋白相关淀粉样变疾病研究进展

致谢

个人简历

展开▼

摘要

目的：
　　家族性淀粉样多发性神经损害(Familial amyloid polyneuropathy, FAP)是一种常染色体显性遗传性疾病,是由基因突变型转甲状腺素(Transthyretin, TTR)形成淀粉样变纤维沉积在细胞外所致。TTR主要由肝脏和脉络丛分泌，生理条件下以同源四聚体形式存在于血液以及脑脊液。研究报道FAP患者淀粉样沉积阳性组织内存在过氧化修饰产物，包括脂肪过氧化标记产物TEBRS、蛋白过氧化标记产物 Carbonyl。此外TTR的S-亚硝基化能够引起其分子立体结构改变，在酸性条件下促进淀粉样变纤维形成。因此，氧化代谢修饰可能参与TTR淀粉样变纤维形成。本研究旨在研究FAP患者TTR蛋白酪氨酸硝基化修饰与淀粉样变纤维形成之间的关系，为解析FAP患者淀粉样变形成的分子机制奠定基础。
　　方法：
　　1.选取FAP患者5例(男性3例，女性2例，年龄58-68岁)，提取外周血细胞DNA，设计TTR基因4个外显子扩增引物，进行PCR体外扩增，之后将扩增产物进行DNA测序，分析FAP患者TTR基因突变类型。
　　2.收集患者尸体解剖的心脏，肾脏以及脑组织，进行石蜡包埋，制备病理组织切片。将组织切片进行刚果红(Congo red, CR)染色结合偏振光显微镜观察，确定FAP患者组织中存在淀粉样变沉积。利用抗TTR特异性抗体免疫组织化学染色，鉴定淀粉样蛋白类型。
　　3.对刚果红染色阳性的组织进行MPO免疫组织化学染色，检测淀粉样变沉积部位MPO表达。
　　4.在FAP患者心肌组织切片上加入反应混合液(10mM PBS，pH7.4，含有100μM DTPA，100μM H2O2，10μM NaNO2和10μM N-acetyl-tyrosine)，37℃下孵育12h，之后用抗3-硝基酪氨酸抗体进行免疫组织化学染色。
　　5.对选取的FAP患者血清总蛋白进行定量TP在65.2-83.5g/L之间。每个研究对象分别取两份等量蛋白(200μg)血清，一份加入反应混合液(10mM PBS，pH7.4，含有100μM DTPA，150 mIU MPO，100μM H2O2，10μM NaNO2)，另一份为对照组，37℃下孵育2h。
　　6.将 MPO/H2O2/NO2-反应体系作用于血清后进行双向电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)以及抗-TTR抗体免疫印迹(Western Blot)实验，对比该硝基化系统作用前后TTR的表达。
　　结果：
　　1.利用PCR体外扩增技术以及结合DNA测序分析技术，分析FAP患者TTR基因型，确定FAP患者TTR基因突变型为TTR V30M。
　　2.通过CR结合偏振光显微镜观察发现，FAP患者心脏，肾脏等组织中存在淀粉样变沉积，利用抗TTR免疫组织化学染色，确定淀粉样变蛋白类型为TTR蛋白。
　　3.FAP患者心脏与脑组织的血管壁中存在淀粉样变沉积，其淀粉样变沉积成分主要累及血管的内膜和外膜。
　　4.对FAP患者心脏、肾脏以及动脉血管组织进行抗MPO抗体免疫组织化学染色，其免疫反应阳性与淀粉样变沉积共存，提示患者组织内淀粉样变沉积成分中存在MPO成分。
　　5.MPO/H2O2/NO2-反应系统与FAP患者淀粉样变沉积共同孵育，结果显示抗3-硝基酪氨酸抗体免疫反应与淀粉样沉积共存，提示淀粉样变蛋白成分能够发生硝基化。
　　6.利用2-DE电泳以及抗3-硝基酪氨酸抗体Western Blot实验结果显示，在MPO/H2O2/NO2-系统作用下，FAP患者血清TTR的等电点发生改变以及表现出蛋白聚合。
　　结论：
　　1.系统分析了FAP患者组织淀粉样变沉积分布特征，发现FAP患者血管淀粉样变沉积主要累积在血管壁内膜和外膜。填补了FAP淀粉样变沉积可累及的组织器官信息。
　　2.首次报道FAP患者的淀粉样变沉积组织中存在MPO成分，且MPO/H2O2/NO2-反应体系能够介导FAP患者组织淀粉样变沉积处蛋白成分发生硝基化修饰。
　　3.FAP患者血清TTR蛋白经过MPO/H2O2/NO2-体系作用，发生硝基化代谢修饰，并且TTR分子聚合具有明显增加趋势。总结研究结果提示FAP患者中TTR蛋白酪氨酸硝基化可能促进TTR聚合，进而有利于淀粉样变沉积形成。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号