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携带sTRAIL的人脐带间充质干细胞对肺癌生长的抑制作用

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前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1对象和方法

1.1研究材料

1.2 研究设备

1.3研究方法

2实验结果

2.1 HUMSCs的成功分离与鉴定

2.2 HUMSCs在体内外均可向肺癌归巢

2.3 MCP-1/CCR2轴促进HUMSCs向肺癌归巢

2.4 表达载体的成功构建及目的基因的表达

2.5 MSC.ISZ-sTRAIL对A549肺癌皮下移植瘤的治疗作用

3讨论

3.1 MSCs作为载体应用于抗肿瘤治疗

3.2 MSCs对肿瘤的作用尚无定论

3.3 MSCs的归巢机制尚不清楚

3.4 MSCs归巢的影响因素

3.5 TRAIL选择性诱导肿瘤细胞凋亡

3.6 结语

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:间充质干细胞的研究进展

致谢

个人简历

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摘要

目的：本课题主要研究MCP-1/CCR2轴在脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells, HUMSCs）向肺癌归巢中的作用和表达sTRAIL的HUMSCs对肺癌生长的抑制作用。
　　方法：体外应用transwell趋化实验检测HUMSCs是否向肺癌细胞A549条件培养基迁移；建立BALB/c裸鼠肺癌皮下移植瘤模型，利用IVIS活体动物成像技术观察HUMSCs向肺癌归巢。ELISA法检测肺癌细胞培养上清中单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoatrractant protein-1，MCP-1）的分泌水平。流式细胞术检测HUMSCs表面MCP-1受体CCR2的表达。转染shRNA敲低肺癌细胞MCP-1的表达和用抑制剂抑制HUMSCs细胞表面CCR2后，transwell检测HUMSCs向肺癌归巢能力的改变。构建慢病毒表达载体，利用293T细胞包装慢病毒颗粒，感染 HUMSCs，将稳定表达并分泌 sTRAL融合蛋白的 HUMSCs经尾静脉注射入荷瘤小鼠体内，另设空载体组、 HUMSCs组及 PBS空白对照组，每隔三天测量肿瘤体积；治疗后第22天，收集小鼠肿瘤组织，石蜡包埋切片，进行H&E及TUNEL染色，评价治疗效果，眼眶取血检测血浆中谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）水平，评价治疗方法的安全性。
　　结果：成功建立 A549肺癌皮下移植瘤模型。HUMSCs在体内外均能向肺癌归巢。肺癌细胞高表达MCP-1，HUMSCs表面高表达CCR2。敲低肺癌细胞MCP-1表达或抑制HUMSCs细胞表面CCR2均可抑制HUMSCs向肺癌的趋化能力。成功构建sTRAIL慢病毒表达载体，经慢病毒感染的HUMSCs（MSC.ISZ-sTRAIL）能够稳定表达sTRAIL。MSC.ISZ-sTRAIL治疗肺癌皮下移植瘤，可引发肿瘤细胞凋亡及组织坏死，并延长荷瘤小鼠的生存期。治疗组与对照组血清ALT、AST水平无明显差异。
　　结论：本课题首次研究并证明了MCP-1/CCR2轴能够促进HUMSCs向肺癌归巢，并证明携带sTRAIL的HUMSCs对肺癌的生长具有抑制作用。此研究为临床应用以MSCs为载体的肿瘤靶向治疗提供了新的实验依据。

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