自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞功能改变及其在治疗中的作用

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目的:研究自身免疫性肝炎（autoimmunehepatitis，AIH）模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原递呈分子MHCII、CD40表达的变化及巨噬细胞吞噬功能的改变，以及氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷对AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响并研究其意义，从而探讨AIH的发病机制及复方甘草酸苷对于AIH治疗作用的免疫学机制，为AIH的治疗以及复方甘草酸苷的应用开辟新的前景。
　　方法:(1)造模:4-6周龄的雌性C57BL/6小鼠，以同种系S-100肝抗原与弗氏完全佐剂充分乳化后分别于第一天及第7天两次予小鼠腹腔注射建立AIH的动物模型，对照组采用同剂量的生理盐水与弗氏佐剂的混合液，并于免疫后第4周末处死小鼠;(2)提取、分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞:提取后置培养箱培养后，用不含小牛血清的RPMI-1640培养液漂洗，然后加含小牛血清的RPMI-1640培养液在培养箱中继续培养以备用;(3)配制药物及体外细胞加药:含小牛血清的RPMI-1640培养液分别将氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷浓度分别调配至1mg/ml，对照组仅加入培养液，培养箱中培养30min，然后加入异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)标记的大肠杆菌(escherichiacoli，E.coli)共孵育;(4)巨噬细胞表面抗原递呈分子测定:加入不含FITC标记E.coli共孵育，用流式细胞仪测定抗原呈递分子MHCII及其协同共刺激分子CD40在正常小鼠及AIH模型小鼠巨噬细胞表面的表达情况，从而判断巨噬细胞的抗原递呈能力;(5)AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定:小鼠腹腔巨噬细胞与FITC标记的E.coli共孵育1小时，用荧光显微镜检测吞噬细菌的细胞数量和吞噬细菌的总数，并用流式细胞仪检测验证吞噬细菌的细胞数量，分析AIH加药组与未加药组和对照组巨噬细胞吞噬功能的差异。
　　结果:(1)流式细胞术检测AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子MHCII表达较对照组明显减低，（对照组VSAIH模型组为:0.762±0.049vs.0.362±0.035，P=0.000），两组比较差异有统计学意义;AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子CD40的表达也显著低于对照组，（对照组VS.AIH模型组为:0.885±0.025vs.0.409±0.018，P=0.000），两组比较差异有统计学意义;(2)荧光显微镜检观察AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数显著低于对照组（吞噬率:0.208±0.046vs.0.465±0.081，P=0.000;吞噬指数:0.390±0.105vs.0.848±0.091，P=0.000）;氢化可的松琥珀酸钠能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数（吞噬率:0.208±0.046vs.0.428±0.073，吞噬指数:0.390±0.105vs.0.798±0.065），复方甘草酸苷也使AIH腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数明显升高（吞噬率:0.178±0.039vs.0.375±0.094，吞噬指数:0.353±0.078vs.0.702±0.084），与AIH小鼠未加药腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数比较均具有统计学差异;(3)利用流式细胞仪验证对照组小鼠、AIH小鼠腹腔巨噬细胞未加药组及加氢化可的松琥珀酸钠组、复方甘草酸苷组的吞噬率（分别为:0.368±0.067，0.184±0.020，0.351±0.047，0.342±0.020），结果进一步验证了荧光显微镜实验结果，即AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率显著降低，氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷均能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率。
　　结论:①AIH小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原递呈分子MHCII、CD40表达减低，巨噬细胞抗原递呈功能减低，可能是AIH发病的重要一环。②AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数也显著低于对照组，氢化可的松琥珀酸钠处理后的AIH小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数显著提高，对研究AIH的发病机制具有重要意义。③复方甘草酸苷也能显著提高AIH小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数，其可能为AIH的治疗提供一个崭新的应用前景。

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作者
杨蜜蜜;
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作者单位

天津医科大学;

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授予单位天津医科大学;
学科临床医学;内科学(消化系病)
授予学位硕士
导师姓名王邦茂;
年度 2013
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肝炎;
关键词
自身免疫性肝炎; 巨噬细胞; 抗原递呈; 甘草酸苷; 吞噬功能; 氢化可的松;

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