糖基化磷脂酰肌醇（GPI）锚定型人B7-1基因重组蛋白锚定自体肿瘤细胞膜对提高CTL杀伤泌尿系统肿瘤细胞的研究

论文说明：缩略词表

前言

实验材料与方法

实验方法

第一部分糖基化磷脂酰肌醇锚定型人共刺激因子B7-1表达质粒的鉴定及其对CHO/DHFR-细胞的转染

1.1 GPI·B7-1表达质粒pCDNA3-GPI-B7-1的酶切鉴定

1.2质粒pSV40-DHFR的扩增和酶切鉴定

1.3脂质体介导的pCDNA3-GPI-B7-1和pSV40-DHFR双质粒共转染CHO/DHFR-细胞

第二部分目的蛋白GPI·B7-1在CHO/DHFR-细胞中的稳定表达

2.1流式细胞术检测目的蛋白的表达

2.2直接免疫荧光染色检测目的蛋白表达

2.3 GPI锚定蛋白的检测(用糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PIPLC)对目的蛋白进行洗脱

第三部分目的蛋白GPI·B7-1的分离提取和对小鼠前列腺癌细胞(RM-1)细胞膜的锚定

3.1 GPI·B7-1蛋白的分离提取

3.2提取的膜蛋白的浓度检测

3.3 WesternBlot检测目的蛋白的活性

3.4 GPI·B7-1对RM-1小鼠前列腺癌细胞细胞膜的锚定

第四部分糖基化磷脂酰肌醇锚定型人共刺激因子B7-1对小鼠的免疫和肿瘤负荷研究

4.1小鼠的免疫和免疫系统功能检测

4.2小鼠的肿瘤接种实验

结果

第一部分糖基化磷脂酰肌醇锚定型人共刺激因子B7-1表达质粒的鉴定及其对CHO/DHFR-细胞的转染

1.1质粒pCDNA3-GPI-B7-1和pSV40-DHFR的酶切鉴定

1.2细胞对G418敏感性的测定

1.3脂质体介导的基因转染

第二部分目的蛋白GPI·B7-1在CHO/DHFR-细胞中的稳定表达

2.1流式细胞术检测目的蛋白的表达

2.2直接免疫荧光染色检测目的蛋白的表达

2.3GPI锚定蛋白的检测

第三部分目的蛋白GPI·B7-1的分离提取和对小鼠前列腺癌细胞(RM-1)细胞膜的锚定

3.1 GPI·B7-1蛋白的分离提取和WesternBlot

3.2 ELISA检测GPI·B7-1蛋白对肿瘤细胞膜的锚定

第四部分糖基化磷脂酰肌醇锚定型人共刺激因子B7-1对小鼠的免疫和肿瘤负荷研究

4.1小鼠的免疫系统功能检测

4.2小鼠荷瘤试验结果

讨论

小结

参考文献

图片1

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致谢

综述 糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1基因肿瘤疫苗研究的理论和实验基础

参考文献

质粒及载体图