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【6h】

Ucf-101对早产鼠高体积分数氧肺损伤的保护作用

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

统计学处理

结果

1、 肺组织病理学改变

2、 Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9蛋白在肺组织的表达与分布

3、 TUNEL检测凋亡结果

4、Omi/HtrA2的胞内转位

附图

讨论

结 论

参考文献

英文缩写及中英文对照

致谢

基因表达调控与高体积分数氧肺损伤

1.对高氧反应的转录因子

2.高氧中特定的下游靶基因

参考文献

攻读硕士学位期间发表和撰写的论文

声明

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摘要

目的:研究 Omi/HtrA2特异性抑制剂(Ucf-101)对早产鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤的保护作用。
  方法:以剖宫术取出孕21d大鼠作为早产鼠,72只新生早产 Wistar大鼠在生后12h随机分为对照组、高氧组、高氧+Ucf-101组,每组24只,高氧+Ucf-101组在高氧暴露前10min,按1.5μmol.kg-1腹腔注射Ucf-101,其余两组在相同时点注射等量的9 g.L-1盐水(N.S),高氧组和高氧+Ucf-101组持续暴露于950ml·L-1氧气中,对照组置于同一室内常压空气中。分别于暴露1d、3d、7d时,每组取动物8只,留取肺组织标本。左肺制作石蜡切片,采用HE染色观察不同时间点其肺组织病理改变;采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-peroxidase,SP)法检测 Omi/HtrA2、X连锁凋亡抑制蛋(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)在各组肺组织的表达;采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡的情况;右肺制作冰冻切片,采用间接免疫荧光双染色法,在激光共聚焦显微镜观察 Omi/HtrA2在细胞内的转位。
  结果:(1)肺组织病理学改变:各实验组暴露1d肺组织病理学检查均无差异。对照组暴露1 d、3d、7d,肺组织未见病理改变,肺组织发育逐渐成熟,肺泡结构逐渐规整,大小均匀,肺泡间隔变薄。与对照组比较,高氧组肺组织可见肺泡炎性改变和肺发育滞后,而高氧+Ucf-101组病理改变较高氧组减轻。(2) Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9蛋白在肺组织的表达与分布:Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9普遍表达于早产鼠肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及血管内皮细胞的胞质中。对照组Omi/HtrA2表达微弱,高氧组Omi/HtrA2随着暴露时间的延长表达逐渐明显,高氧+ Ucf-101组在同一时间点较高氧组减轻,与对照组相比有统计学差异(平均光密度值AOD5.13±0.23vs8.12±1.16vs7.19±0.51、3d5.27±0.80vs9.64±0.8vs8.42±1.67、7d5.42±0.32vs11.95±1.05vs9.07±0.53,1d、3d、7d P<0.01);对照组XIAP表达明显,高氧组XIAP随着暴露时间的延长表达逐渐微弱,高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显增加,与对照组相比有统计学差异(AOD:1d6.91±0.69vs5.69±0.71vs5.98±0.86、3d7.25±2.34vs2.91±0.79vs4.57±1.04、7d6.84±1.0vs1.61±0.75vs3.90±0.98,3d、7d P<0.01);对照组Caspase-9表达微弱,高氧组Caspase-9随着暴露时间的延长表达逐渐明显,高氧+ Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减轻,与对照组相比有统计学差异(AOD:1d3.51±0.56vs6.33±1.10vs4.78±1.18、3d4.23±0.59vs12.17±1.71vs8.86±0.69、7d4.10±0.92vs16.28±1.38vs12.47±1.23,1d、3d、7d P<0.01)。(3) TUNEL检测凋亡结果:对照组有少量 TUNEL阳性细胞,高氧组随着暴露时间的延长TUNEL阳性细胞逐渐增加,高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减少,与对照组相比有统计学差异(凋亡指数:1d14.13±1.70:1d vs25.64±1.01vs20.94±1.70、3d14.05±2.07vs44.58±1.89vs31.38±1.35、7d14.25±1.36vs55.62±1.62vs40.65±1.83,1d、3d、7d P<0.01)(4) Omi/HtrA2的胞内转位:对照组有少量转Omi/HtrA2位阳性细胞,高氧组随着暴露时间的延长Omi/HtrA2转位阳性细胞逐渐增加,高氧+ Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(转位率:1d6.47±0.84vs23.58±2.12vs17.33±0.95、3d7.24±0.95vs39.12±2.23vs32.58±1.25、7d7.80±0.67vs54.12±1.94vs40.57±1.67,1d、3d、7d P<0.01)。
  结论:Ucf-101可能减少Omi/HtrA2在肺细胞胞质中的表达和线粒体的转位,抑制肺细胞凋亡,从而减轻早产鼠高氧肺损伤。

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