CTGF-整合素β1受体信号途径在PASMC增殖、迁移和细胞外基质沉积中的作用

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目的:1.探讨整合素β1受体在CTGF促进PASMC增殖、迁移、细胞骨架变化和细胞外基质分泌中的作用机制。2.初步探讨CTGF-整合素β1受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用。
　　方法:1.分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞,实验使用3～7代细胞；2.加入CTGF和不同浓度整合素β1抗体共同孵育24h、48h、72h、96h和120h,采用WST-1检测整合素β1抗体对CTGF促进PASMC增殖的影响；3.在无刺激因子、CTGF(50ng／ml)和CTGF(50ng／ml)+整合素β1抗体(15mg／L)孵育PASMC24h,采用Transwell小室检测整合素β1抗体对CTGF促进PASMC迁移的影响；4.在无刺激因子、CTGF(50ng／ml)和CTGF(50ng／ml)+整合素β1抗体(15mg／L)孵育PASMC12h和24h,采用考马斯亮蓝R250染色和激光共聚焦显微镜观察细胞骨架改变情况；5.在无刺激因子、CTGF(50ng／ml)和CTGF(50ng／ml)+整合素β1抗体(15mg／L)孵育PASMC72h,采用RT-PCR检测整合素β1抗体对CTGF促进CollagenⅠ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响；并采用蛋白质印迹检测整合素β1抗体对CTGF促进PASMC中Ⅲ型胶原蛋白的表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1／2)的磷酸化水平,并研究整合素β1抗体对ERK1／2信号通路的影响。
　　结果:1.用CTGF(50ng／ml)和整合素β1抗体(0、5、10、15 mg／L)同时孵育PASMC24h、48h、72h、96h和120h,WST-1检测结果表明,整合素β1抗体对CTGF促进PASMC增殖有明显抑制作用(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性,其中整合素β1抗体(15mg／L)在72h抑制率最高。2.Transwell小室检测结果显示,以整合素β1抗体(15 mg／L)封闭PASMC24h后,CTGF刺激的细胞迁移受到明显抑制(P<0.01)。3.考马斯亮蓝R250染色观察细胞骨架变化结果发现,24h时,各组之间细胞骨架变化不明显；在12h时与对照组比较,CTGF组能短暂改变细胞形态；使用整合素β1抗体后,CTGF所引起的细胞形态变化不明显。同时采用激光共聚焦扫描显微镜观察胞内FAK的变化结果发现,12h时,细胞形态及胞质内绿色荧光变化不明显。而CTGF作用PASMCs24h可见细胞形态缩小,胞质绿色荧光(FAK)减弱,分散。但整合素β1抗体作用24h后细胞形态与正常组相近。4.RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CTGF显著促进Ⅰ型胶原-α1、Ⅲ型胶原-β1和纤维连接蛋白-1mRNA表达(P<0.05)；使用整合素β1抗体后与CTGF组比较三种基因mRNA表达均减少(P<0.05)。5.蛋白质印迹结果表明,与对照组比较CTGF明显促进Ⅲ型胶原蛋白表达；使用整合素β1抗体后Ⅲ型胶原蛋白表达较CTGF组减少(P<0.05),但较对照组表达增加；且整合素β1(15mg／L)抗体能明显抑制CTGF诱导大鼠。PASMCs中ERK1／2磷酸化的水平,p-ERK1／2与ERK1／2比值降低(P<0.05)。
　　结论:1.整合素β1介导了CTGF诱导的PASMC增殖、迁移和细胞骨架变化。2.整合素β1可介导外源性CTGF促进PASMCⅠ型胶原-α1、Ⅲ型胶原-α1、纤维连接蛋白-1 mRNA表达,以及介导CTGF促进Ⅲ型胶原蛋白表达。4.整合素β1介导CTGF诱导的PASMC增殖和迁移可能与ERK1／2信号通路有关。4.整合素β1受体信号可能在CTGF介导的PASMC增殖、迁移、细胞外基质沉积和细胞骨架改变等生物学行为中起重要作用；CTGF-整合素受体信号途径可能参与了PAH肺血管重构。

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作者
付杰;
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作者单位

西南医科大学;

泸州医学院;

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授予单位西南医科大学;泸州医学院;
学科儿科学(心血管疾病)
授予学位硕士
导师姓名刘斌;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肺动、静脉疾病;
关键词
整合素; 结缔组织生长因子; 肺动脉平滑肌细胞; 细胞增殖; 细胞迁移; 肺动脉高压; 细胞外信号调节激酶;

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