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缩略词
摘要
前言
1文献综述:C2H2型锌指蛋白基因家族的进化与其在花发育中的作用
1．1．1 C2H2型锌指蛋白的结构
1．1．2 C2H2型锌指蛋白的分类
1．2 C2H2型锌指蛋白家族的基因组进化
1．2．1植物C2H2型锌指蛋白基因家族的研究进展
1．2．2白菜基因组研究进展
1．3 C2H2型锌指蛋白在花发育中的作用
1．3．1 C2H2型锌指蛋白在开花诱导中的作用
1．3．2 C2H2型锌指蛋白在花器官建构中的作用
1．3．3 C2H2型锌指蛋白在花器官成熟中的作用
1．4花粉的发育
1．4．1花粉粒的发育
1．4．2花粉壁的发育
1．4．3花粉管的生长
1．4．4花粉管发育的相关研究
2白菜C2H2型锌指蛋白基因家族的鉴定与表达分析
2．1．1植物材料
2．1．2实验试剂
2．1．3白菜C2H2型锌指蛋白基因的鉴定
2．1．4白菜C2H2型锌指蛋白基因结构、保守域和进化分析
2．1．5白菜C2H2型锌指蛋白基因的染色体定位、基因复制和共线性分析
2．1．6白菜和拟南芥C2H2型锌指蛋白基因的分子进化率
2．1．7白菜C2H2型锌指蛋白基因的Go注释
2．1．8白菜C2H2型锌指蛋白基因的表达分析
2．1．9启动子-GUS融合表达载体的构建和农杆菌转化
2．1．10启动子表达的分析
2．2．1白菜C2H2型锌指蛋白基因的鉴定
2．2．2白菜C2H2型锌指蛋白的分类
2．2．3白菜C2H2型锌指蛋白基因的结构、结构域和进化树分析
2．2．4白菜C2H2型锌指蛋白基因的染色体定位、基因复制和共线性分析
2．2．5白菜和拟南芥C2H2型锌指蛋白基因的进化模式分析
2．2．6白菜C2H2型锌指蛋白的GO分析
2．2．7白菜C2H2型锌指蛋白基因在各组织和器官中的表达分析
2．2．8白菜C2H2型锌指蛋白基因在花粉发育中的表达模式
2．3讨论
2．3．1白菜C2H2型锌指蛋白基因复杂的分子进化和多样的结构
2．3．2白菜C2H2型锌指蛋白在花发育中的潜在角色
3白菜C2H2型锌指蛋白基因BrDAZ3的表达分析
3．1．1植物材料
3．1．2实验试剂
3．1．3白菜核不育两用系‘Bcajh97-01A／B’的人工授粉与取材
3．1．4 DNA、总RNA的提取、cDNA的合成
3．1．5 BrDAZ3序列的扩增和特征分析
3．1．6 BrDAZ3的时空表达分析
3．1．7BrDAZ3的启动子表达分析
3．1．8 BrDAZ3的亚细胞定位分析
3．2结果
3．2．1 BrDAZ3的序列特征
3．2．2 BrDAZ3在雄蕊中特异表达
3．2．3 BrDAZ3定位在细胞质和细胞核中
3．3讨论
3．3．1 BrDAZ3编码了一个定位在细胞质和细胞核的C2H2型锌指蛋白
3．3．2 BrDAZ3是白菜花粉发育后期并在授粉受精过程持续表达的基因
4白菜C2H2型锌指蛋白基因BrDAZ3的生物学功能分析
4．1．1植物材料
4．1．2实验试剂
4．1．3 DNA、总RNA的提取、cDNA的合成
4．1．4 BrDAZ3 RNA干涉表达载体的构建
4．1．5 BrDAZ3过表达载体的构建
4．1．6 BrDAZ3的CRISPR CAS9敲除载体构建
4．1．7 BrDAZ3的RNA干涉、过表达和CRISPR Cas9载体的遗传转化
4．1．8 BrDAZ3的RNA干涉、过表达和CRISPR Cas9转基因植株的分子检测
4．1．9 BrDAZ3的RNA干涉和过表达转基因植株的形态和细胞学观察
4．2结果
4．2．1 BrDAZ3的RNA干涉植株的获得与验证
4．2．2 BrDAZ3的过表达植株的获得与验证
4．2．3 BrDAZ3的CRISPR Cas9敲除植株的获得与验证
4．2．4 BrDAZ3的抑制影响白菜的花粉发育
4．2．5 BrDAZ3的过表达影响白菜的花粉发育
4．3讨论
4．3．1 BrDAZ3的表达异常影响花粉壁的发育
4．3．2 BrDAZ3在花粉管发育的过程中有重要作用
5拟南芥C2H2型锌指蛋白基因AtDAZ3的表达分析
5．1．1植物材料
5．1．2实验试剂
5．1．4 AtDAZ3序列的扩增和特征分析
5．1．5 AtDAZ3的时空表达分析
5．1．6 AtDAZ3的启动子表达分析
5．1．7 AtDAZ3的亚细胞定位分析
5．2结果
5．2．1 AtDAZ3序列的扩增和特征分析
5．2．2 AtDAZ3在成熟花粉时期表达最高
5．2．3 AtDAZ3的启动子表达分析
5．2．4 AtDAZ3定位在细胞质和细胞核中
5．3讨论
5．3．1 AtDAZ3编码了一个定位在细胞质和细胞核的C2H2型锌指蛋白
5．3．2 AtDAZ3是拟南芥花粉发育后期并在授粉受精过程持续表达的基因
6拟南芥C2H2型锌指蛋白基因AtDAZ3的生物学功能分析
6．1．1植物材料
6．1．2实验试剂
6．1．3AtDAZ3 T-DNA插入突变体的鉴定
6．1．4 AtDAZ3 T-DNA插入突变体的表型观察
6．1．5 AtDAZ3特异启动子的过表达载体构建
6．1．6 AtDAZ3 T-DNA插入突变体的表型恢复
6．1．7特异启动子的过表达载体对野生型拟南芥的遗传转化
6．2结果
6．2．1 AtDAZ3的纯合基因型突变体的获得及分子检测
6．2．2 AtDAZ3的缺失表达影响营养生长和生殖生长
6．2．3 AtDAZ3能够恢复突变体atdaz3的表型
6．2．4 AtDAZ3的过表达影响拟南芥的花粉发育
6．3讨论
6．3．1 AtDAZ3通过影响细胞形态参与叶片的发育和花器官的发育
6．3．2 AtDAZ3在花粉壁的发育和花粉管生长过程中扮演重要角色
7 DAZ3在花粉发育过程中的转录调控研究
7．1．1植物材料
7．1．2实验试剂
7．1．3酵母单杂交检测BrDUO1a、BrDUO1b、AtDUO1蛋白分别与BrDAZ3、AtDAZ3启动子的互作及作用位点
7．1．4双荧光素酶实验
7．1．5酵母双杂交检测BrDAZ3、AtDAZ3与AtTPL／TPR、BrTPLTPR的互作及作用位点
7．1．6 BrDAZ3、AtDAZ3、BrTPL／TPR和AtTPL／TPR的亚细胞定位分析
7．1．7双分子荧光互补实验
7．1．8 AtDAZ3可能下游基因的检测
7．2结果
7．2．1 AtDUO1、BrDUO1a能够直接激活AtDAZ3、BrDAZ3的表达
7．2．2 AtTPL／TPR、BrTPL／TPR能够与AtDAZ3、BrDAZ3互作
7．2．3 AtDAZ3／BrDAZ3、AtTPL／BrTPL分别与AtHDA6／BrHDA6、AtHDA19／BrHDA19的互作
7．2．4 AtDAZ3可能下游基因的定量检测
7．3讨论
7．3．1 DAZ3能够被DUO1直接激活转录
7．3．2 DAZ3的EAR结构域能够与TPL／TPR的N端的CTLH结构域互作
7．3．3 DAZ3广泛参与花粉内壁、外壁和花粉管发育的转录调控
7．3．4 AtDAZ3参与细胞循环和细胞分裂的调控
结论
参考文献
附表
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