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论文说明
致谢
摘要
主要缩略词
1文献综述
1．2 FEN1的主要功能
1．2．1 FEN1与DNA复制
1．2．2FEN1与DNA损伤修复
1．2．3 FEN1与凋亡DNA片段化
1．3 FEN1的功能调节机制
1．3．1细胞的区室化
1．3．2蛋白质的相互作用
1．3．3翻译后修饰
1．4蛋白质酰基化修饰的主要功能
1．5本文的理论依据和研究意义
2 FEN1的Lys200、Lys201是重要的酰基化位点
2．1引言
2．2材料与方法
2．2．1主要仪器和试剂耗材
2．2．2细胞系和培养条件
2．2．3细胞的解冻和复苏
2．2．4细胞的消化、传代和冻存
2．2．5定点突变
2．2．6质粒的提取与冻存
2．2．7蛋白的表达、纯化与检测
2．2．8 FEN1酶动力学分析(EMSA)
2．3结果与分析
2．3．2 FEN1的Lys200、Lys201位点突变质粒的构建
2．3．3 Lys200、Lys201是FEN1重要的酰基化修饰位点
2．3．4体外成功表达、纯化出FEN1蛋白
2．3．5 FEN1的WT、K200E、K201E酶动力学分析
2．4小结与讨论
3 FEN1的酰基化影响DNA修复和细胞周期
3．1引言
3．2材料与方法
3．2．1主要仪器和试剂耗材
3．2．2构建稳转细胞株
3．2．3细胞计数及MTS法测定细胞存活率
3．2．4 M2-Beads免疫沉淀法
3．2．5 Western blot实验
3．2．6细胞周期阻滞
3．2．7免疫荧光技术检测蛋白共定位
3．2．8流式细胞术检测细胞周期
3．3结果与分析
3．3．1成功构建稳转K200E、K201E细胞株
3．3．2 K200E、K201E突变降低了细胞的存活率
3．3．3 K200E、K201E突变影响了其与相关蛋白的互作能力
3．3．4 K200E、K201E提高了细胞对损伤剂的敏感性
3．3．5 K200E、K201E突变阻碍了细胞周期进程
3．4小结与讨论
4总结与展望
参考文献
