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响应面法优化提取茜草中大叶茜草素条件考察

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摘要

缩写表

绪论

1.茜草的本草学研究

2.茜草的生物学特性

材料和方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果

3.1 定性鉴别:TLC法

3.2 大叶茜草素和羟基茜草素HPLC含量测定

3.3 茜草提取条件考察

4.讨论

5.结论

参考文献

综述 茜草的研究进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果

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摘要

目的:茜草Rubia tibetica Hook.f.为茜草科植物Rubia cordifolia L.的干燥根及根茎,具有凉血、化淤、止血、通经之功效,被广泛应用于治疗吐血、衄血、跌打损伤、经闭瘀阻等症,其中大叶茜草素和羟基茜草素为2015版《中国药典》中评价茜草质量的指标性成分,具有抗肿瘤、对抗毒激素、止血凝血、增强免疫系统、抗炎、抗氧化、消除自由基和抗辐射等作用。经实验发现,茜草含量测定过程中,供试品溶液制备较为繁琐,且在不断的转移过程中容易产生误差。本研究直接以一定浓度的盐酸甲醇为提取溶剂在相应的温度下进行提取,发现此方法对茜草中大叶茜草素和羟基茜草素有很好的提取效果。鉴此,本实验通过响应面优化实验,以大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定,筛选出最佳盐酸浓度、加热温度和加热时间。
  方法:1.通过考察供试品的制备方法,展开系统等建立茜草药的专属TLC鉴别方法;以大叶茜草素和羟基茜草素的含量为质量控制指标,通过精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验等系统的方法学考察,建立茜草中大叶茜草素和羟基茜草素的HPLC含量测定方法,以3批样品的含量测定结果规定其含量限度。
  2.采用响应面法优化茜草中大叶茜草素提取的最佳工艺条件:在单因素试验的基础上,以大叶茜草素含量为响应值,选择盐酸浓度、加热温度和加热时间作为考察因素,采用Box-Behnken响应面设计法进行优化条件考察。
  结果:采用甲醇溶液超声30min作为TLC鉴别中供试品的制备方法,石油醚∶丙酮(4∶1)作为展开剂,荧光下观察,TLC鉴别斑点清晰、阴性对照无干扰、专属性强;采用HPLC法建立了茜草中的大叶茜草素、羟基茜草素的含量测定方法:结果表明:大叶茜草素在13.78~172.23μg/ml范围内,进样浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率98.9%,RSD为0.74%(n=6),羟基茜草素在6.73~84.10μg/ml范围内,进样浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率97.7%,RSD为1.13%(n=6);以3批样品含量的80%制定茜草的含量限度,规定大叶茜草素的含量不得低于0.96%,羟基茜草素的含量不得低于0.17%,实验结果表明本方法简便可靠,可用于茜草的质量控制,为响应面法优化茜草中大叶茜草素提取的最佳工艺研究提供了稳定的质量检测方法。
  响应面法优化茜草中大叶茜草素提取的最佳工艺条件为盐酸浓度为10.5%,加热时间41min,加热温度82℃条件下,茜草中大叶茜草素得率为2.53%,接近预测值2.51%。
  结论:本研究采用TLC对茜草进行了定性鉴别、采用了HPLC对茜草进行了含量测定,并做了线性回归曲线、精密度、重复性、稳定性和加样回收率的考察。得出:本研究所用样品均含有大叶茜草素和羟基茜草素,且含量普遍高于中国药典的含量要求。
  本研究响应面法优化提取茜草的实验方法,其提取所得的大叶茜草素和羟基茜草素含量均大于药典方法,该优化工艺简便稳定,重复性好,可用于茜草中大叶茜草素的提取。

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