TNFR2激活Stat3和NF-kB信号通路促进OPA1依赖性的线粒体融合

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致谢

摘要

缩略词表

1．引言

2．实验材料

2．1 实验动物及动物模型的构建

2．2 实验仪器

2．3 实验试剂

3 实验方法

3．1 细胞及心脏样本的收集

3．2 Western Blot

3．3 细胞及细胞培养条件

3．4 质粒及病毒的构建

3．5 细胞转染

3．6 组织学分析

3．7 透射电镜样本处理及拍摄

3．8 细胞免疫荧光染色

3．9 小鼠心脏超声

3．10 荧光定量PCR

3．11 组织线粒体的提取

3．12 线粒体的流式细胞仪检测

3．13 细胞及线粒体呼吸功能检测

3．14 染色质免疫共沉淀(CHIP)及PCR

3．15 蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)

3．16 ATP含量检测

3．17 生物信息学分析

3．18 统计学方法

4 结果

4．1 TNFR2激活可以增加NMCMs线粒体的融合和功能

4．2 NMCMs中TNFR2激活对线粒体的生物合成功能没有影响

4．3 TNFR2激活上调NMCMs中OPA1的表达

4．4 TNFR2激活后通过上调OPA1蛋白水平调控NMCMs中线粒体形态和功能

4．5 TNFR2激活后通过Stat3和NF-kB信号通路上调了OPA1的表达

4．6 TNFR2介导的Star3的乙酰化的增加促进了Sat3和RelA的相互作用并由此介导OPA1的上调

4．7 P300介导的Stat3-DBD的乙酰化是促进Stat3／RelA相互作用的关键

4．8 P300介导的Stat3的赖氨酸370和／或者赖氨酸383位点介导了HEK293T细胞中的Stat3／RelA相互作用

4．9 分子动力学模拟定量分析Stat3乙酰化对Stat3／RelA相互作用的影响

4．10 NMCMs中K370和K383位点的乙酰化参与了TNFR2激活介导的OPA1的表达和线粒体的形态功能的改变

4．11 TNFR2介导的线粒体途径的保护作用在TAC中的验证

5．讨论

参考文献

附录

综述 心脏疾病中线粒体动态的分子调控机制

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