海洋曲霉属真菌次级代谢产物生物合成基因簇的基因组挖掘与遗传转化体系构建

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致谢

摘要

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第一章 绪论

1．1 海洋真菌次级代谢产物及生合成研究进展

1．1．1 海洋真菌来源的次级代谢产物

1．1．2 真菌次级代谢产物生物合成研究

1．2 真菌遗传转化系统

1．2．1 真菌营养缺陷型筛选标记

1．2．2 转化方法的选择

1．3 展望

1．4 本课题的研究思路与技术路线

第二章 海洋曲霉属菌株Z5的分离与全基因组SMs基因簇的挖掘

2．1 菌株来源

2．2 材料

2．2．1 培养基配方

2．2．2 主要缓冲液

2．2．3 主要实验试剂

2．2．4 主要仪器

2．3 方法

2．3．1 OSMAC方法检测次级代谢产物

2．3．2 全基因组测序挖掘Z5生物合成基因簇

2．4 结果与讨论

2．4．1 OSMAC分析Z5菌株生产SMs能力

2．4．2 Z5菌株的基因组提取与全基因组测序

2．4．3 Z5菌株的基因组进化分析

2．4．4 SMs生物合成基因簇的挖掘与分析

2．5 小结

3．1 菌株来源

3．2 材料

3．2．1 主要缓冲液

3．2．2 培养基

3．3 方法

3．3．1 菌丝体的培养

3．3．2 直接酶解法制备原生质体

3．3．3 β-巯基乙醇预处理菌丝体与原生质体的制备

3．3．4 原生质体的收集

3．3．5 原生质体的检测与再生

3．4 结果与分析

3．4．1 直接酶解法制备原生质体

3．4．2 β-巯基乙醇处理法制备原生质体

3．4．4 原生质体再生率的检测

3．5 讨论

3．6 小结

第四章 Z5遗传转化体系的构建

4．1．1 实验材料

4．1．2 主要仪器

4．1．3 方法

4．1．4 Double-Joint PCR方法构建两段基因盒

4．1．5 Double-Joint PCR构建三段基因盒

4．2 PEG／CaCl2介导的Z5原生质体的转化

4．2．1 实验材料

4．2．2 方法

4．3 结果与分析

4．3．1 菌株Z5 pyrG基因选用与比对

4．3．2 基因敲除盒的构建

4．3．3 5-FOA致死浓度的测试

4．3．4 菌株Z5的原生质体转化

4．4 讨论

4．5 小结

5．1 全文总结

5．2 研究特色

5．3 展望

参考文献

附表

作者简介