声明
致谢
摘要
第1章 绪论
1．1 前言
1．2 细胞松弛素类物质的研究概况
1．2．1 细胞松弛素的命名和来源
1．2．2 细胞松弛素的结构
1．2．3 细胞松弛素的活性
1．2．4 细胞松弛素的生物合成和化学合成
1．2．5 19，20-环氧细胞松弛素Q(B5A)的研究概况
1．3 吡咯喹啉醌(PQQ)的研究概况
1．3．1 PQQ的发现和分布
1．3．2 PQQ的生物学功能
1．3．3 PQQ的生物合成
1．3．4 PQQ生物合成的调控
1．3．5 PQQ的分离纯化研究
1．3．6 PQQ的测定方法
1．4 本课题的研究目标和意义
第2章 海洋天然产物19，20-环氧细胞松弛素Q分析检测方法的建立
2．1 前言
2．2 实验材料与方法
2．2．1 实验材料与试剂
2．2．2 实验仪器设备
2．2．3 B5A产量的HPLC检测方法
2．2．4 B5A的HPLC-ESI-MS检测方法
2．2．5 B5A的薄层层析(TLC)检测方法
2．2．6 18S rDNA菌种鉴定方法
2．3 结果与讨论
2．3．1 菌种鉴定
2．3．2 B5A的HPLC检测
2．3．3 B5A的薄层层析(TLC)检测
2．3．4 HPLC-MS检测
2．4 本章小结
第3章 海洋天然产物19，20-环氧细胞松弛素Q(B5A)的发酵条件优化
3．1 前言
3．2 实验材料与方法
3．2．1 实验材料与试剂
3．2．2 实验仪器设备
3．2．3 培养基
3．2．4 Xylaria sp．sofl1的培养和保存
3．2．5 Xylaria sp．sofl1菌体湿重的测定
3．3 结果与讨论
3．3．1 培养基种类对Xylaria sp．sofl1生长和B5A合成的影响
3．3．2 培养时间对发酵的影响
3．3．3 不同碳源对Xylaria sp．sofl1生长和B5A合成的影响
3．3．4 不同有机氮源对Xylaria sp．sofl1生长和B5A合成的影响
3．3．5 生物合成前体和海盐对Xylaria sp．sofl1生长和B5A合成的影响
3．3．6 副产物的测定及其对Xylaria sp．sofl1生长和B5A合成的影响
3．3．7 Plackett-Burman(PB)实验筛选关键因素
3．3．8 响应面分析法获得最佳组合
3．3．9 优化后培养基发酵能力的验证
3．3．10 在10 L发酵罐上发酵生产B5A的研究
3．4 本章小结
第4章 海洋天然产物19，20-环氧细胞松弛素Q(B5A)的分离纯化
4．1 前言
4．2 实验材料与方法
4．2．1 实验材料与试剂
4．2．2 实验仪器设备
4．2．3 硅胶柱层析方法
4．2．4 半制备HPLC分离方法
4．2．5 秀丽隐杆线虫的培养和保存
4．2．6 秀丽隐杆线虫存活率测试实验
4．3 结果与讨论
4．3．1 固液分离及目标产物存在量的确定
4．3．2 从菌体中存取B5A
4．3．3 硅胶柱层析分离
4．3．4 半制备色谱纯化
4．3．5 高分辨质谱检测
4．3．6 B5A的毒性检测
4．4 本章小结
第5章 吡咯喹啉醌(PQQ)海洋甲基营养菌的筛选及发酵条件优化
5．1 前言
5．2 实验材料与方法
5．2．1 实验材料与试剂
5．2．2 实验仪器设备
5．2．3 培养基
5．2．4 PQQ的酶法检测方法
5．2．5 PQQ的化学法检测方法
5．2．6 PQQ的高效液相色谱(HPLC)检测方法
5．2．7 海洋PQQ产生菌的筛选
5．2．8 海洋PQQ产生菌的发酵培养
5．2．9 利用16S rDNA基因序列分析法鉴定菌种
5．3 结果与讨论
5．3．1 菌种筛选
5．3．2 菌种鉴定
5．3．3 噬甲基菌ZJU414产PQQ的培养条件优化
5．3．4 PQQ在3 L罐发酵上的发酵
5．4 本章小结
第6章 吡咯喹啉醌(PQQ)的分离纯化
6．1 前言
6．2 实验材料与方法
6．2．1 实验材料与仪器设备
6．2．2 离子交换树脂使用前的处理方法
6．2．3 树脂的筛选方法
6．2．4 静态离子交换平衡时间测定实验
6．2．5 离子交换吸附等温线
6．2．6 PQQ在LKA98树脂上的吸附动力学实验
6．2．7 PQQ在离子交换柱上的吸附穿透实验
6．2．8 洗脱剂及其浓度和流速的选择
6．2．9 PQQ的结晶
6．3 结果与讨论
6．3．1 离子交换树脂的筛选
6．3．2 PQQ在LKA98树脂上的离子交换平衡及热力学
6．3．3 PQQ在LKA98树脂上的离子交换动力学
6．3．4 PQQ在LKA98树脂柱上的离子交换过程
6．3．5 PQQ溶液在LKA98树脂柱上的洗脱过程
6．3．6 PQQ发酵液在离子交换树脂上的吸附和洗脱
6．3．7 PQQ产品的精制
6．3．8 产物分析
6．4 本章小结
第7章 结论与展望
7．1 结论
7．2 展望
参考文献
附录
作者简历
浙江大学;
