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摘要
缩略词表
第一章 前言
1．1 肿瘤抑制因子p53
1．1．1 p53的功能与激活
1．1．2 p53负调控因子
1．1．3 p53蛋白家族、异构体及结构域
1．1．4 核仁与p53信号路径
1．2 肝脏结构功能与发育
1．2．1 肝脏的形态结构及斑马鱼作为肝脏发育研究模型的优势
1．2．2 斑马鱼成肝细胞的起源与特化
1．2．3 斑马鱼肝脏的发育过程
1．2．4 肝脏发育的细胞分子机制
1．3 def基因及defhi429突变体
1．4 斑马鱼作为发育生物学和分子生物学研究模型的优势
1．5 本研究的内容、目的和意义
第二章 材料与方法
2．1 斑马鱼
2．1．1 斑马鱼品系及饲养
2．1．2 斑马鱼的交配及受精卵的收集
2．2 人类细胞系及其培养和转染
2．2．1 细胞系及其培养和冻存
2．2．2 细胞转染
2．3 大肠杆菌菌株
2．4 Morpholino和siRNA
2．5 抗体
2．6 蛋白酶抑制剂
2．7 DNA相关操作方法
2．7．1 基因克隆
2．7．2 DNA测序
2，7．3 质粒定点突变和基因内部特定片段的删除
2．7．4 斑马鱼和人类细胞系基因组DNA的抽提
2．7．5 斑马鱼胚胎原位细胞凋亡分析
2．8 RNA相关操作方法
2．8．1 斑马鱼胚胎及人类细胞系总RNA提取
2．8．2 总RNA样品中基因组DNA的消化
2．8．3 两步法RT-PCR(Reverse Transcription PCR，反转录PCR)
2．8．4 带帽mRNA的体外合成
2．8．5 Northern印记分析
2．8．6 斑马鱼胚胎整胚原位杂交(WISH)
2．9 蛋白质相关操作方法
2．9．1 抗体的制备与纯化
2．9．2 Western印记分析
2．9．3 抗体免疫荧光染色
2．9．4 免疫共沉淀
2．10 流式细胞分析
2．11 斑马鱼显微注射
2．12 斑马鱼胚胎消化器官表型或p53蛋白水平拯救实验
2．13 斑马鱼胚胎存活率分析
2．14 序列比对及进化树分析
2．15 常规培养基及化学试剂配方
2．16 本课题所用引物、Morpholino、siRNA序列以及不同浓度的SDS-PAGE凝胶配方列表
第三章 核仁蛋白Def影响斑马鱼18S rRNA前体剪接
3．1 Def蛋白系统进化分析
3．2 斑马鱼和人类Def均为核仁蛋白
3．3 斑马鱼defhi429突变导致18S rRNA前体累积
3．4 小结与讨论
第四章 斑马鱼defhi429突变导致p53和△113p53蛋白大量上调并累积在核仁
4．1 p53抗体的制备
4．1．1 斑马鱼△113p53抗原的表达和纯化
4．1．2 抗原免疫和抗体纯化、特异性评价
4．2 斑马鱼defhi429突变体中p53和△113p53蛋白表达大量上调
4．3 大量上调的p53和△113p53蛋白定位于斑马鱼defhi429突变体核仁
4．4 小结与讨论
第五章 斑马鱼Def选择性介导p53和△113p53蛋白的降解及其生物学意义
5．1 Def过表达选择性介导p53及其异构体△113p53蛋白的降解
5．2 Def介导p53蛋白降解的生物学意义
5．3 小结与讨论
第六章 斑马鱼Def介导的p53蛋白降解不依赖于Mdm2和蛋白泛素化降解途径
6．1 斑马鱼Def介导的p53和△113p53蛋白降解不依赖于Mdm2
6．2 斑马鱼Def靶向p53DNA结合域介导其降解
6．3 斑马鱼Def介导的p53蛋白降解不依赖于蛋白泛素化降解途径
6．4 小结与讨论
第七章 人类Def多态性呈现对p53／△133p53不同的降解活性
7．1 人类def基因多态性分析
7．2 hu-Def多态性呈现对p53／△133p53不同的降解活性
7．3 小结与讨论
第八章 Def与Calpain3共同介导p53降解
8．1 hu-Def通过Calpain3介导p53蛋白降解
8．2 hu-Def与CAPN3形成复合物
8．3 hu-Def或CAPN3表达下调介导的p53激活不依赖于RPL5和RPL11
8．4 CAPN3表达下调导致细胞G1期阻滞和细胞凋亡增加
8．5 斑马鱼CAPN3b与Def共同介导p53蛋白降解
8．6 小结与讨论
第九章 Def通过CAPN3a调控斑马鱼胚胎早期肝脏发育
9．1 CAPN3a而不是CAPN3b过表达能拯救def-MO引起的小肝脏表型
9．2 CAPN3a而不是CAPN3b表达下调影响斑马鱼胚胎肝脏发育
9．3 小结与讨论
第十章 结论与讨论
10．1 结论
10．2 讨论
参考文献
作者简介
致谢
