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【6h】

几丁质/壳聚糖酶产生菌的分离及发酵条件、酶学性质研究

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目录

前 言

材料与方法

1.菌株和材料

2.培养基

3.试剂

4.仪器设备

5.几丁质酶/壳聚糖酶产生菌的筛选

5.1富集培养与平板第一次筛选

5.2平板第二次筛选

6.几丁质酶和壳聚糖酶产生菌CJ-5的分类鉴定

6.1形态特征鉴定

6.2生理生化特性鉴定

7.摇瓶中CJ-5产几丁质酶发酵条件的优化

7.1制作乙酰氨基葡萄糖标准曲线和氨基葡萄糖标准曲线

7.2.壳聚糖酶和几丁质酶活力的测定

7.3发酵条件的优化

7.4四因素三水平正交试验

7.5 3L发酵罐中CJ-5发酵产酶的研究

7.6 CJ-5菌产壳聚糖酶发酵条件优化

8.几丁质酶/壳聚糖酶理化性质的初步研究

8.1几丁质酶/壳聚糖酶的硫酸铵沉淀

8.2双缩脲测定粗酶蛋白质含量,折算酶活力

8.3酶反应的最适温度和酶的热稳定性

8.4酶反应的最适pH和酶的酸碱稳定性

8.5几丁质酶、壳聚糖酶分子量确定

9.几丁质酶/壳聚糖酶降解产物和降解机理初探

10.CJ-5发酵液生理活性初探

10.1抑制植物病原真菌生长的活性

10.2促进水稻幼苗生长的活性

结 果

1.几丁质酶产生菌的筛选

1.1富集培养和平板第一次筛选

2.菌种的分类鉴定

3.摇瓶中的发酵条件研究

3.1制作氨基葡萄糖标准曲线与N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线

3.2不同温度对菌体生长的影响

3.3不同底物浓度对菌体生长的影响

3.4诱导性与不同碳源对菌株几丁质酶活性的影响

3.5不同氮源对菌株产几丁质酶活性的影响

3.6不同温度对菌株产几丁质酶活性的影响

3.7不同接种量对产几丁质酶活性的影响

3.8发酵培养基初始pH值对菌株产几丁质酶活性的影响

3.9不同底物浓度对产几丁质酶活性的影响

3.10不同装量对产几丁质酶活性的影响

3.11细菌产几丁质酶的正交试验

3.12 3L发酵罐的发酵情况

3.13 CJ-5产壳聚糖酶的正交试验

3.14在最适产酶条件下,CJ-5菌以几丁质和壳聚糖为底物的生长情况及pH变化,还原糖变化和酶活变化

4.几丁质酶和壳聚糖酶理化性质的初步研究

4.1酶蛋白的硫酸铵沉淀

4.2酶蛋白浓度初步分析

4.3几丁质酶和壳聚糖酶的最适反应温度与pH,以及热与pH稳定性的研究

4.4酶的分子量确定

4.5酶产物分析

5.生物活性的初步试验

5.1抑菌实验

5.2水稻幼苗生长试验

讨论

1.几丁质酶产生菌的筛选

2.CJ-5菌种的分类鉴定

3.酶活力测定方法

4.发酵条件的研究

5.酶的盐析沉淀

6.酶分子量的确定

7.酶学性质的研究

8.酶解产物及酶作用机理分析

9.酶生物活性的研究

结束语

参考文献

致 谢

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摘要

该实验室从浙江省滩涂淤泥筛选了一株既产几丁质酶又产壳聚糖酶的菌株CJ-5,经鉴定属于气单胞菌属(Aeromonas).

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