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福建省南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量及其影响因子

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绪论

1南方红豆杉简述

1.1南方红豆杉适宜生境

1.2南方红豆杉的生物学特征

1.3南方红豆杉种群生态学研究

1.4南方红豆杉濒危原因探讨

2紫杉醇及10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的研究进展

2.1紫杉醇及10-DAB的研究现状

2.2紫杉醇提取方法-固相萃取法

2.3紫杉醇的分析检测技术

3紫杉醇及10-DAB含量的影响因子

3.1气候

3.2季节对红豆杉中紫杉醇及10-DAB含量的影响

3.3土壤中不同元素含量对红豆杉紫杉醇含量的影响

4立题

4.1研究意义

4.2本文的研究内容

第一章测定方法

1固相萃取超高效液相色谱法测定南方红豆杉针叶及树皮中紫杉醇和10-DAB的含量

1.1仪器和试药

1.2溶液浸提萃取

1.3固相萃取纯化

1.4 UPLC制备

1.5结果与分析

1.6小结

2土壤环境因子的测定

3统计方法

第二章福建省不同地理种源南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量及影响因子

1胸径14.3~17.5 cm福建省不同地理种源南方红豆杉紫杉醇和10-DAB含量及影响因子

1.1植物材料

1.2土壤环境因子测定

1.3结果与分析

2胸径32cm的福建省不同地理种源南方红豆杉紫杉醇和10-DAB含量及影响因子

2.1植物材料

2.2土壤环境因子测定

2.3结果与分析

3本章小结

3.1不同地理种源红豆杉中紫杉醇含量的差异

3.2南方红豆杉中紫杉醇含量与土壤中元素含量的关系

3.3南方红豆杉与其他红豆杉紫杉醇含量的差异

第三章胸径、组织构件和性别对南方红豆杉紫杉醇及10-DAB含量的影响

1胸径对南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量的影响

1.1植物材料

1.2结果与分析

2组织构件对南方红豆杉紫杉醇和10-DAB含量的影响

2.1植物材料

2.2结果与分析

2.3假种皮与去假种皮种子中紫杉醇与10-DAB含量的差异

3性别对南方红豆杉紫杉醇和10-DAB含量的影响

3.1植物材料

3.2结果与分析

4讨论

4.1胸径对红豆杉中紫杉醇含量的影响

4.2红豆杉不同构件的紫杉醇含量

4.3性别对红豆杉中紫杉醇含量的影响

第四章季节对南方红豆杉紫杉醇及10-DAB含量的影响

1植物材料

2结果与分析

3本章小结

第五章结论与展望

参考文献

个人简历

攻读学位期间承担的科研任务与主要成果

致谢

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摘要

紫杉醇(taxol)是一种从珍稀植物红豆杉中获得的具有独特疗效的抗癌天然植物产物,10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB)为紫杉醇合成的前体物质。本研究以福建省为研究区域,测定分析了福建省不同地理种源的南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量,研究探讨了不同胸径、组织构件、性别和采样季节对紫杉醇和10-DAB含量的影响,主要研究成果如下: (1)不论是紫杉醇还是10-DAB含量,不同地理种源南方红豆杉间差异均较大。胸径14.3~17.5 cm的南方红豆杉中梁野山、龙栖山南方红豆杉树皮及当年生针叶中紫杉醇及10-DAB含量差异不显著(P>0.05),其余各点之间的南方红豆杉中树皮及当年生针叶中紫杉醇及10-DAB含量差异达到极显著水平(P<01)。当年生针叶中的10-DAB含量与土壤中的镁元素显著相关(P<0.05)。胸径32cm的南方红豆杉不论是紫杉醇还是10-DAB含量,不同地理种源间差异均较大,树皮中紫杉醇含量与土壤中铁含量显著相关(P<0.01)。南方红豆杉当年生针叶中及树皮中紫杉醇含量与各种源地气象因子均无显著的相关关系(P>0.05)。 (2)不同胸径南方红豆杉植株当年生针叶中紫杉醇和10-DAB含量的平均值分别为0.0013%和0.0081%,树皮中紫杉醇和10-DAB含量平均值分别为0.0116%和0.0484%。南方红豆杉紫杉醇含量基本为波动状态,并没有呈现随胸径的增长而含量增加。 (3)南方红豆杉不同组织构件(枝条、针叶、树皮和根)中紫杉醇和10-DAB含量的测定表明,根中紫杉醇和10-DAB含量最高,当年生针叶中紫杉醇含量最低。种子中假种皮紫杉醇及10-DAB含量最高,分别占整个种子的95.2%及88%。 (4)不同性别植株中的紫杉醇及10-DAB含量存在差异,雄株当年生针叶中10-DAB含量低于雌株,紫杉醇含量高于雌株;雄株树皮中紫杉醇及10-DAB含量均高于雌株。 (5)天然(10龄)和人工栽培(3龄)南方红豆杉当年生针叶中紫杉醇和10-DAB含量均呈明显的季节变化,各个月份之间含量差异显著,人工栽培和天然南方红豆杉针叶在生长速度明显减缓的10月份,紫杉醇和10-DAB的含量均出现一个明显的峰值。 红豆杉,是近年来植物界走红的“明星”和世界上濒临灭绝的天然珍惜抗癌药物。紫杉醇是一种从红豆杉中获得的具有独特疗效的抗癌天然植物产物,现已被多个国家批准应用于临床治疗卵巢癌和乳腺癌等疾病。南方红豆杉是红豆杉属中分布最广、生长最快的一类植物,由于该物种在自然界多以偶见种形式存在,其自然繁殖更新能力较低,加之长期以来被作为严重砍伐的对象,使该物种的现存数量越来越少,目前已处于濒危状态。因此对南方红豆杉的研究具有重要的理论和现实意义。 本文第一部分综述了国内外关于南方红豆杉的适宜生境、生态生物学特性、濒危因子分析等各方面内容,分析了目前测定紫杉醇及10-DAB的不同方法,探讨了红豆杉中紫杉醇及10-DAB含量的影响因子,并阐述了本文的研究内容、目的与意义等。从国内外关于紫杉醇及10-DAB的提取效果来看,固相萃取(Solid Phase Extraction,简称SPE)技术,由于其具有高效、可靠、消耗试剂少等优点,在许多领域取代了传统的液-液萃取而成为样品前处理的有效手段。由于植物材料中紫杉醇含量很低,且成分复杂,给提取工作造成了很大的困难,而将此方法用于紫杉醇的提取可以快速除去浸膏中的脂、蜡及色素等杂质。高效液相色谱(HPLC)是检测化合物最常用的方法,在紫杉醇的分析检测及分离纯化的应用中也比较广泛。自然界中的紫杉醇主要存在于红豆杉树的全身,以树皮的含量最高,而其含量依种属、植物部位、生长环境、生长年限、采收季节、储藏及加工方法的不同而有显著差异。本部分从气候条件、季节变化及土壤营养元素3个方面对紫杉醇及10-DAB含量的影响因子进行了阐述,比较全面的说明了影响因子的动态特征及其与紫杉醇和10-DAB含量之间的相关关系。 第二部分介绍了本研究所涉及的实验方法,包括紫杉醇及10-DAB的提取、紫杉醇及10-DAB含量的测定及土壤中速效磷、速效氮、速效钾及金属元素钙、镁、铁、锌等各元素的测定方法。 第三部分探究了福建省不同地理种源南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量及影响因子。研究结果表明,不论是紫杉醇还是10-DAB含量,不同地理种源南方红豆杉间差异均较大。(DBH)14.3~17.5 cm的南方红豆杉中梁野山、龙栖山南方红豆杉树皮及当年生针叶中紫杉醇及10-DAB含量差异不显著(P>0.05),其余各点之间的南方红豆杉中树皮及当年生针叶中紫杉醇及10-DAB含量差异达到极显著水平(P<0.01)。当年生针叶中的10-DAB含量与土壤中的镁元素显著相关(P<0.05)。(DBH)32 cm的南方红豆杉不论是紫杉醇还是10-DAB含量,不同地理种源间差异均较大,树皮中紫杉醇含量与土壤中铁含量显著相关(P<0.01)。南方红豆杉当年生针叶中及树皮中紫杉醇含量与各种源地气象因子均无显著的相关关系(P>0.05)。本研究的结果也表明,即使年龄(胸径)相同、采样时间相同,采样组织部位相同,南方红豆杉由于生长的地理位置和环境的不同,其紫杉醇和10-DAB含量差异也较大。不同地理种源地的红豆杉中紫杉醇含量差异较大的原因应该说是很复杂的,需要结合遗传、生理生态等方面的深入的研究才能得出准确的结论和解释。目前,还未见相关的文献报道。影响红豆杉中紫杉醇含量的因子很多,既包括植物个体自身代谢能力的差异,也包括一些环境因素对它的影响,如光照等,对于这种差异的解释需要更多更深入的科学研究加以探索。 第四部分分析讨论了胸径、组织构件和性别对南方红豆杉中紫杉醇和10-DAB含量的影响。系统采集了12个胸径大小的南方红豆杉样品,不同胸径南方红豆杉植株当年生针叶中紫杉醇和10-DAB含量的平均值分别为0.0013%和0.0081%,树皮中紫杉醇和10-DAB含量平均值分别为0.0116%和0.0484%。本文对不同胸径的南方红豆杉中紫杉醇含量的研究表明,南方紫杉醇含量基本为波动状态,并没有呈现随胸径的增长而含量增加。当年生针叶、树皮中紫杉醇及10-DAB含量与胸径相关性不显著。南方红豆杉不同组织构件(枝条、针叶、树皮和根)中紫杉醇和10-DAB含量的测定表明,根中紫杉醇和10-DAB含量最高,当年生针叶紫杉醇中含量最低。种子中假种皮紫杉醇及10-DAB含量远大于去假种皮的种子,分别占整个种子的95.2%及88%。不同性别植株中的紫杉醇及10-DAB含量存在差异,雄株当年生针叶中10-DAB含量低于雌株,紫杉醇含量高于雌株,雄株树皮紫杉醇及10-DAB含量均高于雌株。 第五部分阐述了天然和人工栽培南方红豆杉当年生针叶中紫杉醇和10-DAB含量的季节变化规律。天然和人工栽培南方红豆杉当年生针叶中紫杉醇和10-DAB含量呈明显的季节变化,各个月份之间含量差异显著,对于人工栽培3龄南方红豆杉,紫杉醇和10-DAB含量均具有2个明显的峰值,出现的时间也几乎一致,紫杉醇的2个峰值分别6月份和10月份,10-DAB则分别个峰值是5月份和10月份。对于10龄的天然南方红豆杉,紫杉醇和10-DAB含量的最高峰值很明显,均出现在10月份,但第2个次高峰值不显著,在盛夏的8月份出现最低值。不论是人工栽培、还是天然的南方红豆杉,其针叶在生长速度明显减缓的10月份,紫杉醇和10-DAB的含量均出现一个明显的峰值。 第六部分是本文的结论和展望部分,对本文的研究成果进行了总结,并对本研究存在的问题及不足之处进行了分析,并就将来的研究进行了展望,具有一定的参考意义。

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