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血浆可溶性选择素在儿童ITP中的作用研究

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选择素对ITP患者白细胞、血小板与内皮细胞相互作用的影响

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特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)又称之为免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura)是小儿最常见的出血性疾病之一。发病率约为5/10万，绝大多数急性病例可以自愈，但仍有7％～28％转为慢性，这其中有部分患儿需要作脾切除手术才能得以缓解。通常认为ITP的发病机制是外周血中的血小板通过膜表面的糖蛋白抗原识别循环中的血小板自身抗体并被致敏，随后被脾、肝、骨髓中有活性的网状内皮组织系统过早从外周血中清除而使其寿命缩短，外周血中血小板浓度下降。除了吞噬作用外，还有包括补体激活、T淋巴细胞直接杀细胞作用在内的破坏机制。脾脏是自体反应的T淋巴细胞和B淋巴细胞相互作用、激活和自体反应的抗血小板抗体产生的部位，大多数ITP病人血小板破坏的主要部位在脾脏。然而，致敏机体内循环中血小板如何进入脾索，又如何被巨噬细胞识别并清除，尚未阐明。二十世纪九十年代以来国内外学者先后发现ITP患者血浆P-选择素、E-选择素水平增高并且活化的内皮细胞可能是ITP病人体内可溶性P-选择素的主要来源，这提示ITP时脾窦血管内皮细胞活化程度增高，脾脏可能是病理状态下可溶性E-选择素、可溶性P-选择素的主要来源。其作用可能是增强了脾窦血管内皮细胞对循环中淋巴细胞和血小板的黏附功能，从而使淋巴细胞和血小板进入脾窦，并进一步激活淋巴细胞，引发对血小板的自身免疫破坏。 本实验拟通过检测ITP患儿血浆可溶性L-选择素、可溶性E-选择素、可溶性P-选择素的浓度变化，研究三者与血小板破坏的相关性，探讨其对ITP发病的意义。从而为临床判断病情、观察疗效、确定脾切除手术指征、评估预后提供理论依据。 材料与方法 1．对象：ITP患儿共40例，其中AITP组25例，CITP组15例，AITP于治疗前，CITP于随诊血小板计数未恢复正常时抽取外周静脉血2ml．进行检验。对照组15例为年龄、性别相近的健康体检儿童。 2．外周血浆的制备：取外周静脉血2ml加入装有0.2m11％EDTA抗凝剂的离心管中，混匀抗凝，2000r/min离心10分钟，用移液器将上清液移入．Appendolf管中，-80℃冰箱冻存待测。 3．血浆可溶性选择素的检测：以血浆为标本，用双抗夹心ELISA法遵照试剂盒说明书进行检测。 4．统计学分析：采用统计学分析软件包SPSS14.0进行统计学分析，统计数据用均数±标准差(x±s)表示，采用独立样本t检验、单因素方差分析和直线相关分析。 结果 1．血浆sE浓度比较：ITP组患儿血浆sE浓度为2.03±0.80 ng/ml，其中AITP组为2.18±0.87 ng/ml，CITP组为1.79±0.62 ng/ml，对照组儿童为1.12±0.52 ng/ml；ITP组患儿血浆sE浓度明显高于对照组，差异有显著性(P=0.000)，其中AITP组与对照组(P=0.000)，CITP组与对照组(P=0.009)，血浆sE浓度均明显升高，差异有统计学意义。AITP组虽然高于ClTP组，但无统计学意义(P>0.05)。 2．血浆sP浓度比较：ITP组患儿血浆sP浓度(610.11±200.67 ng/ml)低于对照组(843.62±256.80 ng/ml)，差异有显著性(P=0.001)。ITP组患儿血浆sP/Plt浓度为33.00±11.74 ng/ml，其中AITP组为35.52±13.50 ng/ml，ClTP组为28.79±6.41 ng/ml，对照组为3.40±1.12 ng/ml；ITP组患儿血浆sP/Plt浓度明显高于对照组，差异有显著性意义(P=0.000)，AITP组与CITP组血浆sP/Plt浓度均高于对照组10倍左右，其中AITP组又明显高于CITP组。AITP组与对照组(P=0-000)，CITP与对照组(P=0.000)，AITP组与CITP组(P=0.04)，差异有统计学意义。 3.血浆sL浓度比较：ITP组患儿血浆sL浓度为3882.68±2107.31 ng/ml，其中AITP组为4044.04±2334.48 ng/ml，CITP组为3613.76±1704.16 ng/ml，对照组为3396.04±2096.46 ng/ml；ITP组患儿血浆sL浓度稍高于对照组，差异无显著性(P=0.448)，AITP组与CITP组血浆sL浓度均高于对照组，AITP组又高于CITP组，但各组之间均无统计学意义(P>0.05)。 4.血浆sP与血小板计数的相关性分析：ITP组患儿血浆sP与外周血小板计数成显著正相关(r=0.540，p=0.000)；AITP组患儿血浆sP与外周血小板计数成正相关(r=0.654，p=0.000)；然而，CITP组患儿血浆sP与外周血小板计数无相关性(r=0.196，p=0.483)。 5.血浆sP/Plt与外周血小板计数的相关性分析：ITP组患儿血浆sP/Plt与外周血小板计数成负相关(r=-0.532，p=0.000)：AITP组患儿血浆sP/Plt与外周血小板计数成负相关(r=-0.464，p=0.019)：CITP组患儿血浆sP/Plt与外周血小板计数成显著负相关(r=-0.834，p=0.000)。 6.血浆sE与外周血小板计数的相关性分析：ITP组患儿血浆sE与外周血小板计数无相关性(r=-0.104，p=0.525)。 7.血浆sL与外周血小板计数的相关性分析：ITP组患儿血浆sL与外周血小板计数无相关性(r=0.028，p=0.865)。 结论 1.sP、sE与儿童ITP的发病有关，表现为脾窦血管内皮细胞活化程度增高，sP、sE的表达增高，致使T淋巴细胞和B淋巴细胞在脾窦被激活，导致机体细胞免疫和体液免疫紊乱。 2.脾窦血管内皮细胞表达P-选择素增高，导致血液循环中致敏血小板在脾脏被俘获，并进一步被破坏，导致血小板减少。 3．AITP组血浆sP/Plt浓度高于CITP组，提示AITP组脾脏窦内皮细胞活化程度较CITP组高，因而血小板破坏程度较重。 4．本实验阐明了选择素与ITP发病的意义，但其具体机制仍有待进一步深入探讨研究。

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