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2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的多重PCR检测及PRRSV分离株部分基因序列分析

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论文说明：符号说明

前言

论文研究一 检测猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

论文研究二、检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒多重RT-PCR方法的建立

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

论文研究三 2005年、2006年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的多重PCR检测

1、材料与方法

2、检测结果

3、讨论

论文研究四、猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株部分基因序列分析

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

参考文献

全文小结

致谢

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摘要

根据GenBank中已发表的序列，设计针对猪伪狂犬病病毒TK基因和猪细小病毒VP2基因的特异性引物，参考有关文献得到扩增猪圆环病毒2型ORF2基因的引物，建立针对上述三种病毒的多重PCR方法，可在一次PCR反应中扩增出相应的277bp,511bp和404bp的目的片段。同时，针对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因和猪瘟病毒NS5A基因，设计特异性引物，建立针对上述两种RNA病毒的多重RT-PCR方法，可同时扩增出相应的876bp和465bp的目的片段。实验结果表明这两个多重PCR方法特异、敏感、快速，具有广阔的应用前景。 应用上述两个多重PCR方法，对来自江苏地区的211份猪高热病病料进行检测，结果显示93份病料为PCV2阳性，阳性率为44.1％；8份病料为PPV阳性，阳性率为3.9％；5份病料为PRV阳性，阳性率为2.4％；108份病料为PRRSV阳性，阳性率为51.2％；22份病料为HCV阳性，阳性率为10.4％。其中，混合感染PCV2、PRRSV和HCV的病料有11份，占病料总数的5.4％；混合感染PCV2、PRRSV和PRV的病料有1份，占总数的0.5％；混合感染PCV2和PRRSV的病料有54份，占总数的25.6％；混合感染PRRSV和HCV的病料有5份，占病料总数的2.4％；混合感染PCV2和HCV的病料有4份，占总数的1.9％；混合感染PCV2和PPV的病料有7份，占总数的3.4％；混合感染PCV2和PRV的病料有2份，占总数的1.0％；混合感染HCV和PRV的病料有1份，占总数的0.5％。统计数据发现，2005年病料中PCV2的阳性率为21.2％，2006年为73.2％：2005年PRRSV的阳性率为38.1％，2006年为67.7％，这两种病毒的阳性率上升明显，而另外3种病毒的阳性率变化不大。通过流行病学调查，表明PRRS和PCVD在江苏地区呈流行趋势，混合感染多发。 对05年、06年分离于江苏地区的PRRSV毒株的ORF5基因测序。结果表明，所有毒株ORF5基因大小均为603bp。将本试验所分离的毒株与国外美洲型毒株相比，发现ORF5序列同源性为84.5％-92.2％，而与国内毒株的同源性为96.8％-99.8％，与欧洲型毒株之间的同源性比较低，为59.8％-61.8％。05年、06年江苏地区PRRSV分离株ORF5基因间的同源性为96.9％-99.8％。同时将2005年、2006年分离到的各3个毒株Nsp2部分核苷酸序列与GenBank中已发表序列进行比较，发现2006年分离到PRRSV Nsp2核苷酸序列都有87个碱基的缺失，所测其余部分的同源性高达979％-98.9％；2005年所分离到的3个毒株Nsp2核苷酸序列没有缺失，彼此之间的同源性为96.5％-98.5％。结果表明，江苏地区PRRSV分离株ORF5序列同源性非常高，而2006年分离的PRRSV Nsp2核苷酸序列有87个碱基的缺失，由此产生的生物学意义，有待于进一步研究。

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