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转基因烟草表达西红花CSzCD基因产生西红花酸及化学合成的西红花酸体外抗肿瘤作用研究

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摘要

第一章转基因烟草表达西红花CSzCD基因产生西红花酸

引言

1.材料和方法

1.1.材料

1.2方法

2结果与分析

2.1西红花柱头总RNA的提取

2.2.含有pMD-18-T-CSzCD质粒测序结果

2.3转化进大肠杆菌JM109中pBI121-CSzCD重组质粒的鉴定

2.4重组质粒pBI121-CSzCD转入农杆菌中的鉴定

2.5烟草组培

2.6转基因烟草的PCR检测和Southern blotting分析

2.7转基因烟草的Western blotting检测

2.8转基因烟草中代谢产物的紫外扫描及HPLC分析

3.讨论

参考文献

第二章化学合成的西红花酸体外抗肿瘤作用研究

引言

1实验材料

1.1材料与仪器

1.2试剂的配制

2方法:

2.1 MTT法

2.2细胞计数

2.3 DNA ladder

3实验结果

4结论与分析

参考文献

综述 植物次生代谢产物研究进展

致谢

在读期间发表论文情况及获奖情况

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摘要

西红花系鸢尾科多年生草本植物,是一种珍贵药材,还用作天然香料、染料,用途广泛。其药用部位是柱头,有效成分主要是西红花素,西红花酸,西红花醛和西红花苦素。为了扩大西红花中有效成分的来源和进一步系统的了解西红花酸对肿瘤细胞的抑制作用,本论文对西红花中克隆的CSzCD基因进行了转化烟草的研究,期望通过转基因烟草来建立获得西红花酸的生物反应器;同时对化学合成的西红花酸进行了系统的抗肿瘤作用筛选研究。 1.为研究转基因烟草中产生西红花酸的可行性,在本研究中,西红花玉米黄素裂解酶(CSzCD)基因插入到pBI121载体的花椰菜花病毒(CaMV)35S启动子下游,通过农杆菌介导整合到烟草基因组中。通过Southern blotting分析得到21株转基因烟草株系;对转基因烟草叶片提取物进行Western blotting分析和HPLC分析,结果显示有CSzCD蛋白的表达和西红花酸的产生,阴性对照中并没有发现西红花酸的存在。 2.用体外细胞培养法研究化学合成的西红花酸对五种肿瘤细胞株生长的抑制作用。方法:采用MTT法,DNA Ladoler测定西红花酸对Burkitt's淋巴瘤细胞Raji,慢性髓原白血病细胞K562,人膀胱癌细胞BIU-87,人结肠癌细胞COCa2,人肺癌细胞A549生长的抑制情况。

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