中药防龋药效学实验方法的建立——口腔微生物学实验

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龋病是人类最常见的口腔感染性疾病，严重危害口腔及全身健康。研究证实，龋病是由于口腔生态失衡造成正常菌群变为条件致病菌而引起。防止龋病的关键是调整口腔生态平衡，达到生态防治龋病。本研究组最早开始中药防龋的生态系列研究，在国内外率先开展中药防龋药物的筛选和防龋机制的初步研究。已建立了中药防龋筛选体外实验方法，筛选出具有防龋效果的中药，为深入研究中药防龋的药效学研究方法提供了实验药物。药效学是研究药物对人体及病原体产生药物效应动态变化规律的科学。如何采用现代科学技术手段说明中药的药效学，使中药为国际市场所接受，是目前中药研究面临的最重要、最关键的问题，是使中药打入国际市场，发挥中国传统医学巨大优势的至关重要的一步。因此中药药效学的研究和评价方法对中药的开发、研制和利用有重要而深远的意义。目前国内中药研究已开展多个系统的药效学研究方法及评价，但是有关中药防龋的药效学研究方法及评价尚是空白。中药防龋的研究应结合现代药效学研究新方法和新技术建立口腔细菌学和牙齿再矿化的药效学研究方法，系统、全面和科学评价中药的防龋效果，为中药防龋的深入研究提供有效的实验手段和方法。本研究在前期研究工作的基础上，以五倍子和蜂房为实验药物，研究中药对口腔细菌和细菌生物膜的作用，建立中药防龋药效学实验的细菌学评价方法，为中药的药效学研究方法增加新内容。方法：对与龋病发生关系密切的口腔细菌进行系统的体外实验，验证五倍子多酚性化合物(GCE)和五倍子B(GCE-B,30％乙醇提取物)以及蜂房95％组分(NVE1)对口腔细菌致龋毒力因子的抑制作用，评估药物对口腔5种与致龋密切相关的细菌的生长、产酸、产糖及粘附的作用：用MBEC<'TM>-HTP-Assay方法测定实验药物五倍子和蜂房有效成分对口腔细菌生物膜的MBEC(Minimal biofilm eradication concentration)，研究和评估药物对与龋病发生密切相关的5种单菌生物膜以及多菌生物膜生长的抑制和清除作用；运用半定量可见光测定OD值的方法以及荧光显微镜结合特异荧光染料标记口腔细菌生物膜中死菌和活菌的方法，研究和评估实验药物五倍子和蜂房有效成分对口腔细菌生物膜的生物密度、对口腔细菌生物膜结构、对口腔细菌生物膜活性以及对口腔细菌生物膜中细菌代谢等方面的作用。结果：通过对实验药物五倍子和蜂房有效成分对口腔细菌致龋毒力因子的抑制作用研究，发现药物对细菌的产糖、产酸以及粘附的抑制作用均表现出良好的效果，为下一步研究药物对口腔细菌生物膜的作用提供了实验依据；研究药物对龋病发生密切相关的5种细菌生物膜生长的抑制作用，发现口腔5种与龋病发生密切相关的细菌形成的单菌或多菌悬液都能在MBEC<'TM>-Device上形成良好的细菌生物膜(扫描电镜观察)。实验药物对口腔细菌生物膜的生长抑制结果发现五倍子有效成分GCE和GCE-B对口腔生物膜细菌发挥了有效的抑制作用，蜂房有效成分NVE对单菌生物膜抑制作用明显强于多菌生物膜；实验药物五倍子和蜂房有效成分对口腔细菌生物膜的生物密度，形态结构，生物膜活性以及代谢等方面影响的作用，结果发现三种中药有效成分对口腔细菌生物膜都有一定的浓度依赖性，随着药物浓度提高，作用就越明显。同一药物浓度下，成熟细菌生物膜对药物的敏感性比早期生物膜要小得多。就对口腔细菌生物膜密度影响来看，五倍子有效成分对口腔细菌生物膜的作用比蜂房有效成分显著。五倍子和蜂房有效成分对口腔细菌生物膜的抑制作用不单纯是对口腔生物膜细菌的杀灭作用，可能通过对口腔细菌生物膜结构的改变调整其内部的细菌组成而发挥一定作用。五倍子多酚性化合物(蚴和蜂房有效成分NVEl对24 h口腔细菌生物膜产生的GTF活性发挥了有效的抑制作用。结论：多指标的、系统的、全面的和科学的研究中药对口腔细菌及细菌生物膜的作用，建立中药防龋细菌学的药效学研究和评价方法，为今后中药防龋的深入研究提供了有效的实验手段和评价方法；为中药的药效学研究方法增加了新内容；MBEC<'TM>-HTP-Assay是测定口腔细菌生物膜MBEC重复性好，敏感度高，一次可以检测多个样本量的方法，比MIC更客观的反应生物膜细菌对中药的敏感性，建立中药防龋的药物敏感实验方法，提供准确的药物作用的浓度范围。为口腔微生物学细菌药敏实验方法增加新内容。

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作者
赵今;
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作者单位

四川大学;

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授予单位四川大学;
学科口腔临床医学
授予学位博士
导师姓名周学东;
年度 2006
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类龋齿;中药临床药理;
关键词
中药防龋; 口腔细菌; 细菌生物膜; 药效学实验; 龋病;

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