声明
英 文 缩 略 词 表
1. 引言
1.1 原发性肝癌
1.2 内质网应激与肝癌发生发展
1.3 新型神经营养因子MANF
1.4 MANF可能是一个肿瘤抑制因子
1.5 MANF蛋白转录和分泌的调控
1.6 转录因子AP-1与肿瘤
2 材料与方法
2.1 实验用细胞株
2.2 临床标本收集
2.3 实验用质粒
2.4实验用抗体
2.5其他主要实验用试剂
2.6实验用主要仪器与设备
2.7 实验中常用试剂溶液配制
2.8 质粒鉴定
2.8.1 感受态制备
2.8.2 质粒转化
2.8.3 质粒小抽过程：按照试剂说明书进行，具体过程如下
2.8.4 小抽质粒的鉴定
2.9 质粒大抽
2.10 c-fos siRNA 以及c-jun siRNA的合成
2.11 引物合成
2.12 免疫组化实验过程
2.13免疫荧光双标
2.14蛋白质印迹技术Western blot
2.15 双荧光素酶报告基因实验
2.16染色质免疫共沉淀实验[chromatin immunoprecipitation (ChIP) assays]
2.16.1交联和细胞分离
2.16.2 裂解和MNase消化
2.16.3免疫共沉淀实验
2.16.4 IP洗脱
2.16.5 DNA恢复
2.16.6 PCR检测
2.17 Real-time PCR实验
2.17.1 总RNA提取
2.17.2 逆转录
2.17.3 Real-Time PCR
2.18 Transwell侵袭（铺胶）和迁移实验（不铺胶)
2.19软琼脂克隆形成实验
2.20平板克隆形成实验
2.21统计学分析
3 实验结果
3.1 AP-1上调肝癌细胞MANF的表达
3.1.1 过表达AP-1上调MANF的转录
3.1.2 沉默AP-1下调MANF的转录
3.1.3 AP1上调MANF的蛋白表达
3.1.4 沉默AP-1下调MANF蛋白表达
3.2 人MANF基因上游AP-1结合位点的分析和预测
3.3 双荧光素酶报告基因方法证实AP-1上调MANF的转录
3.4 c-fos和c-jun与MANF启动子区DNA的相互作用
3.5 c-fos或c-jun抑制肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力
3.5.1 c-fos或c-jun抑制肝癌细胞的增殖能力
3.5.2 沉默c-fos或c-jun促进肝癌细胞的增殖能力
3.5.3 c-fos或c-jun过表达抑制肝癌细胞的侵袭能力
3.5.4沉默c-fos或c-jun促进肝癌细胞的侵袭能力
3.5.5 c-fos或c-jun抑制肝癌细胞的迁移能力
3.5.6 沉默c-fos或c-jun促进肝癌细胞的迁移能力
3.6 AP-1和MANF在原发性肝细胞癌组织中的表达及其相关性分析
4.讨论
4.1 转录因子AP-1上调肝癌细胞MANF的转录和翻译
4.2 转录因子AP-1与人MANF基因的顺式作用元件结合并增强MANF的转录活性
4.3 c-fos或c-jun可能通过上调MANF表达抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移功能
4.4人HCC组织中AP-1表达及与MANF的关系
5.结论
6.创新之处
参考文献
附录
在学期间的研究成果
致谢
综述:新型神经营养因子MANF研究进展
