桩蛋白家族成员Leupaxin在整合素介导的细胞粘附中的作用

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研究目的：
　　探讨桩蛋白家族成员Leupaxin与整合素alpha4（α4integrin）之间的相互作用关系，证实两者在体内特异性结合，找出其结合位点，并通过实验进一步证明对细胞的粘附和迁移有着重要作用。
　　研究方法：
　　1.构建pcDNA3.1（-）α4 integrin重组质粒并将其与GFP-Leupaxin（GFP-LPXN）重组质粒共转染真核细胞，构建过表达两种蛋白模型，并做免疫共沉淀实验证明两者在体内特异性结合；
　　2.共转染His-Myc-α4 integrin重组质粒与分别敲除总LD区、LD1、LD2、LD3及LD4的GFP-LPXN重组质粒，检测其表达与结合情况，探索两种蛋白的结合位点。
　　3.在Jurkat E6细胞中转染GFP-LPXN、GFP-LPXN-△LD3及GFP-vector，并给予纤维粘连蛋白（fibronectin，FN）刺激，通过粘附实验观察其粘附情况。
　　4.在Jurkat E6细胞中转染GFP-LPXN、GFP-LPXN-△LD3及GFP-vector，通过Transwell实验观察其迁移情况。
　　研究结果：
　　1.His-Myc-α4 integrin重组质粒成功构建并表达，共转染后，免疫共沉淀实验证实Leupaxin与α4 integrin特异性结合；
　　2.共转染α4 integrin与完整的LPXN及分别敲除LD1/2/3/4区的GFP-LPXN，蛋白成功表达，且敲除LD3区及总LD区的Leupaxin无法与α4 integrin发生特异性结合，证明两者结合位点即为LD3。
　　3.粘附实验证实，相对于转染完整的GFP-LPXN的Jurkat细胞，转染GFP-LPXN-△LD3的细胞粘附率明显下降；Transwell实验表明，转染GFP-LPXN-△LD3细胞运动能力出现明显增强，发生迁移的细胞增多。
　　结论：
　　桩蛋白家族成员 Leupaxin与整合素α4 integrin可发生特异性结合，结合位点为Leupaxin蛋白的LD3区，LD3的缺失可造成Leupaxin与α4 integrin无法结合，并降低细胞的粘附力，提升细胞的迁移能力。

著录项

作者
姚洋;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科肿瘤学
授予学位硕士
导师姓名冷彦;
年度 2015
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R329.28;
关键词
桩蛋白家族成员; 整合素alpha4; 特异性结合; 细胞粘附; 重组质粒;

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