自制颗粒酶B兔多克隆抗体用途及脾脏各部分主要免疫细胞组成检测

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背景：
　　颗粒酶B（granzyme B）是一种丝氨酸蛋白酶，杀伤细胞（NK细胞或者CTL细胞）分泌的穿孔素在靶细胞上“打孔”，颗粒酶B通过穿孔素打的“孔”进入靶细胞对靶细胞造成损伤。目前发现人的颗粒酶B全长分子量为32kDa，本课题组前期实验和他人实验均发现另外一种分子量的颗粒酶B：35kDa颗粒酶B。进一步研究表明两种形式的颗粒酶B定位及功能存在差异，商品化抗体不能满足这方面的研究，因此有必要自制抗体研究其功能及定位。
　　脾脏是机体最大的免疫器官，其免疫细胞的变化可反映全身的免疫反应。其取材方便、细胞数多、可用于多个实验，如免疫组化、PCR、流式、免疫荧光等。因此，在实验中通常将部分脾脏代替整个脾脏进行某种实验，但缺乏相关的实验依据。本论文第二部分旨在为实际的实验操作提供一些理论支持。
　　目的：
　　（1）探索自制抗血清是否能检测人的32kDa和35kDa颗粒酶B，其是否适用于多种实验方法。
　　（2）脾脏各部分主要免疫细胞的比例是否存在差异。
　　方法：
　　（1）利用蛋白印迹、免疫组织化学、免疫荧光、免疫细胞化学法，使用抗血清检测颗粒酶B并摸索其合适的使用浓度。
　　（2）取C57和bm12小鼠脾脏，按脾脏的长轴将其均分为三部分，流式细胞术检测各部分主要免疫细胞的组成。
　　结果：
　　（1）抗血清可以检测人的32kDa和35kDa的颗粒酶B；可用于做western blot、免疫组化法，其最佳使用浓度分别为1:4000、1:14000；抗血清亦可用于冷丙酮固定方式的免疫细胞化学最佳使用范围1:2000-1:14000；抗血清可能不适合免疫荧光；
　　（2）脾脏均分成三部分，流式细胞术检测主要免疫细胞组成比例无显著差异。

著录项

作者
高明;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科免疫学
授予学位硕士
导师姓名郑芳,龚非力;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫生物学;
关键词
免疫细胞; 脾脏组织; 颗粒酶B; 抗血清检测;

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