第一部分实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞移植到梗死心肌后的存活;第二部分心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞后全身细胞分布的实验研究

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第一部分：实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞移植到梗死心肌后的存活目的：建立一种干细胞移植到梗死心肌后检测其存活数量的有效方法。方法：选取10只雌性SD大鼠结扎前降支，心肌梗死3周后，随机分成移植组及对照组，同时选取雄性大鼠培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)，分别将MSCs(3×106个，50μL)及等体积的PBS液移植到梗死心肌中，24h后通过实时定量PCR(Real-time PCR)检测雄性大鼠Y染色体上特有的基因SRY，从而得知移植MSCs的存活数量。结果： MSCs移植24h后，移植组梗死心肌中检测到SRY基因数占移植总数的14.9％±8.3％，存活细胞的绝对数量为447195±248090，而对照组均未检测到SRY基因的存在。结论：用Real-time PCR的方法能有效地检测到具有SRY基因的干细胞，从而能准确地得知移植干细胞的存活数量，Real-time PCR技术在心梗后干细胞移植的基础研究及临床应用中具有重要的价值。第二部分：心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞后全身细胞分布的实验研究目的：观察经心肌梗死边缘区移植骨髓间充质干细胞(MSCs)24小时和2周后的全身分布情况。方法：雄性SD大鼠的MSCs用溴脱氧尿苷(BrdU)标记。雌性SD大鼠经心梗3周后随机分为2组。第1组为标记细胞(3×106，50μL)经心肌注入心梗边缘区(n=20)。第2组为等体积的磷酸盐缓冲盐水(PBS)经心肌注入心梗边缘区(n=20)。移植细胞24小时及2周后，体内细胞的分布情况通过实时定量PCR法(RT-PCR)检测及病理切片免疫组化染色来评价。结果：细胞经心梗边缘区移植后可以分布在心脏以及心外脏器脾脏、肺脏和肝脏中。移植24小时后细胞主要在心脏中分布(467467±191387)，其它脏器中的分布较少，而在2周后移植细胞在包括心脏(112388±43751)在内的各个脏器中的分布都很少，病理切片免疫组化染色结果显示与RT-PCR结果相符。结论： MSCs经心梗边缘区移植后主要在心脏中分布，同时脾脏、肺脏、肝脏中也有分布，但其分布数量随着移植时间锐减。

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作者
王业焕;
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作者单位

温州医科大学;

温州医学院;

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授予单位温州医科大学;温州医学院;
学科胸心外科学
授予学位硕士
导师姓名孙成超;
年度 2009
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R542.22;
关键词
心肌梗死; 细胞移植; 实时定量PCR法; 骨髓间充质干细胞;

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