口蹄疫病毒抑制G3BP1介导的RIG--I信号通路机制

声明

英文缩略表

第一章 引 言

1.1天然免疫概况

1.1.1天然免疫基本介绍

1.1.2 抗病毒天然免疫及模式识别受体

1.2抗病毒天然免疫信号转导及其调节机制

1.2.1 TLRs介导的天然免疫信号转导

1.2.2 RLRs介导的天然免疫信号转导机制

1.3 RNA 结合蛋白家族在抗病毒天然免疫中的作用

1.3.1 RNA 结合蛋白家族种类与结构

1.3.2 RNA 结合蛋白调节天然免疫的抗病毒机制

1.4 口蹄疫及口蹄疫病毒

1.4.1 口蹄疫

1.4.2 口蹄疫病毒

1.4.3 口蹄疫病毒的结构与功能

1.5 FMDV 蛋白研究进展

1.5.1 FMDV 蛋白与宿主互作研究进展

1.5.2 FMDV 蛋白调节天然免疫研究进展

1.6 本研究的目的和意义

第二章 G3BP1正调控RIG-I信号通路的机制研究

2.1 材料与方法

2.1.1载体、细胞、病毒以及生化试剂

2.1.2 仪器设备

2.1.3 试剂配制

2.1.4 质粒的构建

2.1.5 细胞转染

2.1.6 免疫共沉淀和免疫印迹

2.1.7 双荧光素酶报告基因实验

2.1.8 VSV空斑实验

2.1.9 激光共聚焦显微镜实验

2.1.10 实时荧光定量 PCR

2.1.11 过表达， RNAi，敲除细胞系构建

2.1.12体外 pull down实验

2.2 结果

2.2.1 过表达G3BP1在RNA病毒诱导的I型干扰素信号通路中的作用

2.2.2 沉默和敲除G3BP1对RNA病毒的调节作用

2.2.3 G3BP1增强细胞的抗病毒应答

2.2.4 G3BP1在VISA上游水平调节天然免疫信号通路

2.2.5 G3BP1与RIG-I有相互作用

2.2.6 G3BP1 拮抗RNF125介导RIG-I的降解并促进RIG-I结合5′ppp-dsRNA

2.2.7 G3BP1增加RNF125自身泛素化

2.3 讨论

第三章 口蹄疫病毒 3A 抑制G3BP1介导的RIG-I信号通路机制研究

3.1 材料与方法

3.1.1载体、细胞、病毒以及生化试剂

3.1.2 仪器设备

3.1.3试剂配制

3.1.4 质粒的构建

3.1.5 病毒感染及病毒滴度测定

3.1.6 病毒拷贝数测定

3.1.7 实时荧光定量PCR

3.1.8 RNAi载体的构建

3.2 实验结果

3.2.1 G3BP1以及它的突变体对FMDV的影响

3.2.2 猪源G3BP1促进RLH介导的信号转导

3.2.3 FMDV 3A与G3BP1相互作用

3.2.4 FMDV 3A增强FMDV复制和增殖

3.2.5 FMDV 3A抑制G3BP1介导的RLH抗病毒信号

3.2.6口蹄疫病毒3A通过自噬途径降解G3BP1

3.2.7口蹄疫病毒3A通过上调LRRC25的表达来降解G3BP1

3.2.8 LRRC25增加FMDV复制和增殖

3.2.9多种小RNA病毒的3A蛋白通过LRRC25蛋白降解G3BP1

3.3讨论

第四章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历