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儿童急性呼吸道感染流感嗜血杆菌耐药性及产β-内酰胺酶株耐药分子机制特征分析

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目的:调查重庆地区急性呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)的感染情况及其对常用抗菌药物耐药性、耐药表型特点。探讨产β-内酰胺酶Hi菌株blαTEM-1基因多态性与其对β内酰胺类抗菌药耐药的相关性。　　 方法:收集2006年1月至2009年12月重庆医科大学附属儿童医院急性呼吸道感染患儿临床资料、细菌培养和药敏结果,分析Hi感染和耐药情况。PCR检测β-内酰胺酶基因,微量肉汤稀释法检测随机选取的99株blaTEM-1 PCR阳性的Hi对6种抗菌药敏感性,SSCP和测序分析blαTEM-1基因多态性,分析Hi blαTEM-1基因流行基因型及突变型。　　 结果:13842份病例中,Hi感染1967份,占14.2％。95.5%的Hi分布在≤5岁年龄段;40.3%Hi感染患儿合并其它致病菌感染;Hi产酶率达35.8%,＞5岁组的产酶率相对低。Hi对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、阿奇霉素、利福平、环丙沙星耐药率低于10%;连续四年Hi对氨苄西林、四环素和氯霉素耐药率分别为31.8%-40.0%、31.8%-36.0%、18.705%-22.7%;对复方磺胺甲嗯唑(SXT)耐药率最高69.0%-77.4%。多重耐药Hi达30.0%;74.1%的Hi分布在8个常见的耐药表型;SXT最多,31.1%-34.5%,其次Amp-SXT-CHL-TET为12.6%-19.3%;产酶组菌株集中在氨苄西林耐药表型。97株头孢硝噻吩水解阳性的Hi均产TEM-1型β-内酰胺酶,没有ROB-1型;blαTEM-1 PCR阳性而头孢硝噻吩水解阴性2株;74.7%的Hi株blαTEM-1基因全长PCR产物不是预期的1075bp。99株Hi blαTEM-1多肽性不是呈现在氨基酸编码区,而是在调控的编码。99株Hi blαTEM-1启动子被分为SSCP1-SSCP6共6种基因型,分别为Pdel,Pa/Pb,P4,Prpt.b,2Prpt,P3.b启动子。首次在Hi中发现blαTEM-1 P4启动子,共7株,其中6株并A182C突变。以135bp缺失的Pdel启动子为主要,达53.5%:其次,为198bp后插入54bp重复片段并G175A突变的Prpt.b启动子,占18.2%;G175 A替代的Pa/Pb启动子17.2%。高耐氨苄西林(MIC≥128μg/ml)菌株47.2%为Pdel.a,28.0%为Prpt.b,13.2%为Pa/Pb启动子;高耐头孢丙烯(MIC≥128μg/ml)菌株集中在Pdel.a启动子。　　 结论:　　 1.≤5岁儿童是Hi感染易感人群,尤其当免疫力下降时更易感染。　　 2.TEM-1型β-内酰胺酶是本地区Hi氨苄西林耐药的主要机制。　　 3.Hi的blαTEM基因启动子呈多态性,本地区存在6种blαTEM基因启动子;以Pdel.a,Pa/Pb和Prpt.b为流行的主要启动子类型。　　 4.Pde1.a,Prpt.b和2Prpt启动子可能增加β-内酰胺酶的表达而引起氨苄西林和头孢丙烯高水平耐药。

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