脊髓背角mGluR5/ERK信号通路对甘氨酸受体α1ins亚基的特异性调节作用

声明

缩略词

第一章 前言

1.1 甘氨酸受体的生物学特征

1.1.1 甘氨酸受体的结构

1.1.2 甘氨酸受体亚基的剪接异构体

1.1.3 甘氨酸受体的功能调控

1.2 代谢型谷氨酸受体

1.2.1 代谢型谷氨酸受体的分类

1.2.2Ⅰ型代谢型谷氨酸受体(Group Ⅰ mGluRs)参与的信号通路

1.2.3Group Ⅰ mGluRs与神经系统疾病

1.3 细胞外信号调节激酶 (ERK)

1.3.1 MAPK家族蛋白组成

1.3.2 Ras/Raf/MEK/ERK信号通路

1.3.3 脊髓背角神经元中的ERK与疼痛

1.4 假设

第二章 实验材料与实验方法

2.1实验材料

2.1.1 实验仪器仪器

2.1.2 多肽和质粒构建

2.1.3 药物与试剂

2.1.4 抗体

2.1.5 实验溶液及配置

2.2 实验方法

2.2.1 动物及疼痛模型的建立

2.2.2 鞘内注射

2.2.3 小鼠脊髓背角的病毒注射

2.2.4 电生理膜片钳记录

2.2.5 行为学测试

2.2.6 细胞培养和转染

2.2.7 免疫沉淀和免疫印迹

2.2.8 免疫细胞化学染色

2.2.9 免疫组织化学染色

2.2.10 GST沉淀实验

2.2.11 体外磷酸化反应

2.2.12 蛋白的质谱分析

2.2.13 数据统计

第三章 实验结果

3.1 mGluR5对脊髓背角甘氨酸能突触传递的影响

3.1.1Group Ⅰ mGluRs对甘氨酸能突触传递的影响

3.1.2 mGluR5对甘氨酸能突触传递的影响

3.1.3 mGluR5/ERK通路对甘氨酸能突触传递的影响

3.1.4 mGluR5调节甘氨酸能传递的突触后机制

3.2 mGluR5对甘氨酸受体α1ins亚基的特异性调节作用

3.2.1 mGluR5对α1ins介导的甘氨酸受体电流的影响

3.2.2 mGluR5/ERK通路对α1ins介导的甘氨酸受体电流的影响

3.3α1ins亚基在脊髓痛觉传递中的作用

3.3.1α1ins在脊髓背角的表达及其功能

3.3.2 shRNA-α1ins对神经元兴奋性的影响

3.3.3 mGluR5对脊髓背角中α1ins亚基介导的甘氨酸能突触传递的影响

3.3.4 mGluR5对α3亚基介导的甘氨酸能突触传递的影响

3.4 ERK与α1ins的相互作用

3.4.1 ERK与α1ins的特异性结合

3.4.2磷酸化的ERK与α1ins的特异性结合

3.4.3 TAT-pep-α1ins对ERK/α1ins相互作用的影响

3.4.4 TAT-pep-α1ins对mGluR5抑制α1ins电流的影响

3.5 ERK对α1ins亚基第380位丝氨酸的磷酸化作用

3.5.1 ERK对α1ins亚基的磷酸化修饰

3.5.2 TAT-pep-α1ins对ERK磷酸化α1ins的影响

3.5.3 TAT-pep-α1ins对mGluR5诱发的α1ins磷酸化的影响

3.5.4 TAT-pep-α1ins对mGluR5诱发的小鼠自发性疼痛的影响

3.6 Ser380的磷酸化对α1ins的泛素化和内陷的影响

3.6.1 Ser380的磷酸化对α1ins的泛素化的影响

3.6.2α1ins的主要泛素化位点

3.6.3 Eps15在mGluR5调节α1ins膜表达中的作用

3.6.4 mGluR5对α1ins内陷的调节作用

3.7 TAT-pep-α1ins对炎性疼痛小鼠脊髓背角甘氨酸能突触传递的影响

3.7.1炎性损伤对α1ins的调节作用及其机制

3.7.2 TAT-pep-α1ins对Formalin诱发的疼痛反应的影响

3.7.3 TAT-pep-α1ins对Formalin小鼠GlyRs-IPSCs的影响

第四章 讨论

第五章 结论与展望

5.1 主要结论

5.2 研究展望

参考文献

在学期间的研究成果

一、研究成果

二、在学期间参与的课题

致谢