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树豆酮酸A对HepG2细胞体外糖代谢的影响及改善HepG2细胞胰岛素抵抗的实验研究

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0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2方法

2 结 果

2.1 HepG2细胞生长曲线的测定

2.2 树豆酮酸A对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

2.3 己糖激酶(HK)和丙酮酸脱氢酶(PDH)的标准曲线

2.4 树豆酮酸A对HepG2细胞HK和PDH活性的影响

2.5 IR-HepG2细胞模型的建立

2.6 树豆酮酸A对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

2.7 树豆酮酸A对IR-HepG2细胞HK和PDH活性的影响

2.8 树豆酮酸A对IR-HepG2细胞AMPK和AKT蛋白表达的影响

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述：糖代谢相关酶及胰岛素信号通路在糖尿病研究方面的研究进展

作者简历

致谢

学位论文数据集

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摘要

目的：探讨树豆酮酸A（Cajanonic acid A）对HepG2细胞体外糖代谢的影响及对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用，并探讨相关机制。　　方法:　　第一部分、研究树豆酮酸A对HepG2细胞体外糖代谢的影响　　1.体外培养HepG2细胞，检测经不同浓度（10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L和10-6mol/L）树豆酮酸A作用24h后HepG2细胞对葡萄糖代谢的影响；　　2.ELISA法检测经不同浓度（10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L和10-6mol/L）树豆酮酸A作用24h后HepG2细胞糖代谢相关酶己糖激酶（HK）和丙酮酸脱氢酶（PDH）的活性。　　第二部分、研究树豆酮酸A对HepG2细胞胰岛素抵抗（IR-HepG2）的改善作用　　1.经不同浓度（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L和10-9mol/L）胰岛素作用HepG2细胞后，选择出现最佳抵抗作用的胰岛素浓度；在采用最佳胰岛素抵抗浓度作用HepG2细胞不同时间（12h、24h、36h和48h）后，选择最佳抵抗作用时间，建立胰岛素抵抗模型；　　2.检测经不同浓度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞对葡萄糖代谢的影响；　　3.ELISA法检测经不同浓度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞糖代谢相关酶己糖激酶(HK)和丙酮酸脱氢酶（PDH）的活性；　　4.蛋白印迹法（Western blot法）检测经不同浓度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞中AMPK和AKT蛋白的表达水平。　　结果:10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L浓度树豆酮酸A作用24h后HepG2细胞葡萄糖的消耗量分别为（8.650±0.319）mmol/L、（8.231±0.182）mmol/L和（8.136±0.402）mmol/L,与阴性对照组（6.521±0.056）mmol/L相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）；10-3mol/L和10-4mol/L浓度树豆酮酸A作用24h后HepG2细胞内己糖激酶含量分别为（882.91±30.72）pg/mL和（718.25±20.37）pg/mL，与阴性对照组（616.65±17.24）pg/mL相比，己糖激酶活性增加；10-3mol/L浓度树豆酮酸A作用24h后HepG2细胞内丙酮酸脱氢酶含量为（1526.69±66.74）pg/mL，与阴性对照组（1204.73±55.72）pg/mL相比，丙酮酸脱氢酶活性增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。10-7mol/L胰岛素作用HepG2细胞24h后，可以建立稳定的胰岛素抵抗模型；10-3mol/L、10-4mol/L浓度树豆酮酸A作用24 h后IR-HepG2细胞葡萄糖的消耗量分别为（7.934±0.013）mmol/L、（7.032±0.032）mmol/L，与阴性对照组（5.952±0.015）mmol/L相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）；10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L浓度树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞内己糖激酶含量分别为（568.87±39.77）pg/mL、（495.43±35.43）pg/mL和（489.63±27.30）pg/mL，与阴性对照组（444.42±33.52）pg/mL相比，己糖激酶活性增加；10-3mol/L、10-4mol/L浓度树豆酮酸A作用24 h后IR-HepG2细胞内丙酮酸脱氢酶含量分别为（1765.54±135.26)pg/mL、（1620.48±149.81）pg/mL，与阴性对照组（1247.92±152.47）pg/mL相比，丙酮酸脱氢酶活性增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）；10-3mol/L、10-4mol/L树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞内AMPK蛋白的表达增加，10-3 mol/L树豆酮酸A作用24h后IR-HepG2细胞内AKT蛋白的表达增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1.树豆酮酸A在体外能促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取，具有降糖活性，其作用可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性有关。　　2.树豆酮酸A对HepG2细胞胰岛素抵抗具有一定改善作用，其作用可能与增强糖代谢相关酶己糖激酶和丙酮酸脱氢酶活性以及上调AMPK、AKT蛋白的表达有关。

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