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慢性乙肝患者PMNs内CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2的表达

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引言

第一部分 慢性乙肝患者外周血中性粒细胞CXCR1、CXCR2活化与调节

1．1 乙肝慢性化的细胞分子机制

1．2 炎症形成机制

1．3 中性粒细胞在慢性乙肝炎症形成过程中的作用

1．4 CXCR1、CXCR2结构和信号传导

1．5 CXCR1、CXCR2与其共配体CXCL8的相互作用

1．6 CXCL8结构和功能

1．7 CXCL8、CXCR1／2与乙型肝炎

第二部分 慢乙肝患者PMNs内CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2 mRNA的表达

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

第三部分 慢乙肝患者外周血PMNs内CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2蛋白的表达

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果

3．4 讨论

结论

参考文献

致谢

作者简介及读研期间主要科研成果

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摘要

目的:探讨慢性乙肝患者外周血CXCL8含量及中性粒细胞CXCL8、CXCR1、CXCR2的表达水平。观察HBV侵染中性粒细胞后对CXCL8及其受体CXCR1、CXCR2表达的影响。
　　方法:筛选慢性乙肝患者42例，其中HBeAg阳性、阴性患者分别为17和25例，HBV-DNA阳性和阴性患者分别为13例和29例，以ELISA法检测患者血清CXCL8水平，Trizol提取PMNs总RNA．并逆转录为cDNA，qPCR法检测慢性乙肝PMNs内CXCL8、CXCR1、CXCR2 mRNA表达量，以IgcDNA/lgGAPDH代表其最终mRNA水平。进一步观察血清CXCL8含量及PMNs内CXCL8、CXCR1、CXCR2mRNA表达水平与血清ALT水平的相互关系。采用SABC细胞免疫化学染色法观察患者外周血PMNs内CXCL8、CXCR1、CXCR2的表达，对比观察HBV侵染PMNs后对CXCL8、CXCR1、CXCR2表达的影响。
　　结果:慢性乙肝患者血清CXCL8含量为(432.43±216.33) pg/mL。其中．HBeAg(+)与HBeAg（-）患者CXCL8含量分别为(612.15±165.56) pg/mL和(310.21±152.42) pg/mL，差异有统计学意义(P＜0.01)。HBV-DNA(+)与HBV-DNA（-）患者CXCL8含量分别为(593.74±174.03) pg/mL和(360.11±195.05) pg/mL,差异亦有统计学意义（P＜0.01）。患者外周血PMNs内CXCL8、CXCR1的mRNA水平分别为1.12±0.21、0.86±0.37，较正常对照组明显升高(P＜0.01)。其中HBeA9(+)患者CXCL8、CXCR1的mRNA水平分别为1.54±0.30、1.01±0.34，与HBeAg(-)组对照组相比，差异有显著性（P＜0.05）;HBeAg(+)患者CXCR2的mRNA水平为1.21±0.15，与HBeAg(-)患者1.13±0.32相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。HBV-DNA(+)组与HBV-DNA(-)组相比，CXCL8、CXCR1的mRNA水平分别为1.22±0.26、1.05±0.21与1.08±0.18、0.79±0.42，差异有显著性(P＜0.05);CXCR2的mRNA水平分别为1.13±0.25和1.17±0.29，差异无统计学意义(P＞0.05)。血清CXCL8水平与ALT异常升高呈正相关(r=0.859，P＜0.01)，PMNs内CXCL8、CXCR1的mRNA与ALT异常升高亦有一定相关性(r=0.688．P＜0.01;r=0.585，P＜0.01)，而CX CR2表达与ALT异常升高无明显相关性(r=0.088，P＞0.05)。SABC免疫细胞化学染色结果显示，CXCL8主要位于PMNs胞浆中，CXCR1、CXCR2多见于胞浆和胞膜上。其中HBeAg(+)者CXCL8、CXCR1免疫着色较深，而CXCR2免疫着色较浅;PMNs内HBVDNA(+)者CXCL8、CXCR1免疫着色亦较深，而CX CR2免疫着色亦较浅。与对照组相比，CXCL8、CXCR1的表达水平差异均有显著性(P＜0.05)，而CXCR2的表达无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:HBV除对肝细胞具有较高亲嗜性，还能侵染中性粒细胞，形成肝外潜伏或隐匿感染，此可能是导致慢性乙肝病情迁延反复、久治难愈的重要病因。慢性乙肝患者外周血CXCL8含量增高，PMNs内CXCL8、CXCR1、CXCR2的mRNA水平增高，其中，血清CXCL8水平及CXCL8、CXCR1的mRNA与血清ALT含量呈正相关。HBV侵染中性粒细胞后可干扰宿主细胞正常代谢，使CXCL8分泌增加，细胞膜上CXCR1、CXCR2表达增强。CXCL8主要位于PMNs胞浆中，CXCR1、CXCR2多见于胞浆和胞膜上，其着色程度与患者HBeAg表达、HBV DNA载量密切相关。HBV侵染中性粒细胞后可使胞内分泌释放CXCL8进一步增加，胞膜CXCR1表达进一步增强。高表达CXCR1的中性粒细胞又与CXCL8相互作用，趋化吸引更多中性粒细胞至病灶，参与局部炎性损伤和组织修复。

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