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儿童感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药性分析及SCCmec分子流行病学调查研究

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1.引言

2.材料

2.1菌株来源

2.2试剂

2.3 仪器:

2.4 抗生素

2.5培养基

2.6 PCR反应引物

3.方法

3.1初筛MRCNS

3.2药敏实验

3.3 万古霉素耐药菌株的检测

3.4 PCR法鉴定van基因、mecA基因及进行SCCmec基因分型

3.5 统计学处理

4.结果

4.1 MRCNS种类分布及检出率

4.2 MRCNS耐药性分析

4.3 SCCmec基因分型及各型所占比例

4.4 MRCNS不同SCCmec型别的耐药率

5.讨论

6.结论

参考文献

附录

致谢

综述: 儿童感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药现状及耐药机制分析

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摘要

目的:
  了解安徽地区儿童感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(Methicillin Resistant Coagulase-Negative Staphylococcus, MRCNS)的耐药现状和葡萄球菌染色体mec基因盒(Staphylococcal Chromosomal Cassette mec, SCCmec)基因型分布及各基因型耐药特点,以指导临床用药。
  方法:
  1.对安徽地区2010年至2014年临床送检的儿童感染凝固酶阴性葡萄球菌进行耐药表型筛选,全部菌株由全自动微生物分析仪自动鉴定系统初步鉴定。利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增mecA的方法收集MRCNS菌株。
  2.采用琼脂倍比稀释法测定MRCNS对16种抗生素的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)值,对万古霉素表型耐药菌株采用菌谱分析法和美国临床实验室标准化委员会2013推荐的含6mg/L万古霉素脑心浸液琼脂稀释法进行鉴定。
  3.应用PCR检测万古霉素表型耐药菌株的vanA、vanB、vanC1、vanC2/3基因,并对MRCNS进行SCCmec基因分型。
  结果:
  1.经表型筛选及mecA基因检测双重方法共收集MRCNS148株,其中包括表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、模仿葡萄球菌、华纳葡萄球菌、腐生葡萄球菌、耳葡萄球菌和头状葡萄球菌。所占比例分别为44.59%(66/148株)、19.59%(29/148株)、25.68%(38/148株)、2.70%(4/148株)、2.03%(3/148株)、2.03%(3/148株)、1.35%(2/148株)、0.68%(1/148株)、0.68%(1/148株)、0.68%(1/148株)。
  2.药敏分析显示MRCNS对青霉素、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南耐药率均达100%,对阿奇霉素、红霉素、环丙沙星、克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、利福平、替考拉宁、氯霉素、万古霉素的耐药率分别为97.98%、92.57%、83.78%、79.05%、35.81%、43.24%、24.32%、2.03%、8.78%、0.68%。
  3.发现1株异质性万古霉素耐药菌株,其对万古霉素和替考拉宁的MIC值分别为32mg/L和64mg/L,但对利福平、左氧氟沙星敏感。PCR法未检出其含有vanA、vanB、vanC1、vanC2/3基因。
  4.148株MRCNS的SCCmec分型共有I-V5种型别,以III型为主,IV型检出IVa、IVc、IVd3种亚型,并有较多的混合型存在。
  5.所有型别对青霉素、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南、红霉素、阿奇霉素、环丙沙星及克林霉素的耐药率很高,对左氧氟氟沙星、利福平、庆大霉素耐药率相对较低;I、II、IV、V未发现氯霉素耐药菌株。
  结论:
  1.安徽地区儿童MRCNS对多种常用抗生素不敏感,具有多重耐药性,有异质性万古霉素耐药菌株,应予警惕。
  2.不同类型的MRCNS所携带的SCCmec型别不同,SCCmecIII型为主要流行菌株。
  3.MRCNS对非β-内酰胺类抗生素耐药率的差异与SCCmec基因型别无明显相关性。

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