流感病毒血凝素抑制肽结构修饰与活性评价

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

流行性感冒又称流感,是由流感病毒(IV)引起的急性呼吸系统传染病,每年在世界范围内约造成300-500万人严重患病,导致高达500,000人的死亡[1-2]。流感病毒是正黏病毒科的RNA病毒,其基因组由数段单独的RNA片段组成[3]。其中,对人类威胁最大的甲型流感病毒基因组由8条负链RNA片段构成,编码全部10种病毒蛋白:3种RNA聚合酶亚基(PA,PB1,PB2),2种包膜糖蛋白(HA、NA),两种基质蛋白(M1、M2),核衣壳蛋白(NP)和两种非结构蛋白(NS1、NS2)[4]。现有的两种抗流感药物M2通道阻滞剂和神经氨酸酶抑制剂分别靶向M2蛋白和NA蛋白,而其他的蛋白同样可以被用来作为研制抗流感药物的新靶标[5]。流感病毒包膜糖蛋白HA能特异性识别并结合宿主细胞的唾液酸受体并介导膜融合作用,这是病毒感染的关键。因此,HA抑制剂具有开发成抗病毒药物的潜力[6]。
　　本室利用噬菌体随机肽库筛选H1N1型流感病毒HA结合肽时,发现了一条命名为P19的12肽具有一定的抗H1N1病毒活性。P19能阻止H1N1病毒感染细胞,抑制细胞病变效应(CPE)的IC50约为100μM。由于P19特异性靶向亲和HA,因此我们推测P19的作用机制是与HA特异性结合后占据了其活性位点。由于P19抗病毒活性较弱,而许多研究表明多肽类药物氨基酸残基的微小变化可能造成其活性的巨大改变[7]。因此,本课题开展了对P19序列的结构修饰研究,并对修饰后多肽的抗病毒活性做了体内外的一系列评价。
　　本论文的主要研究内容包括以下三个方面:1)对P19修饰多肽快速、高效的合成、纯化方法的研究;2)对P19多肽修饰位点及修饰方案的研究;3)对修饰后的多肽进行活性筛选,并对其中抗病毒活性较好的多肽进行活性评价[8]。本论文所获得的研究结果如下:
　　1.对P19进行丙氨酸扫描研究肽序上单个氨基酸残基对整条序列的活性影响。对9条丙氨酸扫描修饰过的多肽进行抑制流感病毒致MDCK细胞病变(CPE)活性的初筛,发现P19-8的抗IV活性有所提升,并确定抑制H1N1型流感病毒CPE的IC50约为48.5μmol/L。
　　2.对P19-8进行了定点氨基酸替换修饰和D构型扫描,并对P19-8修饰序列进行了细胞水平的抗IV活性筛选。发现P19-8活性提升位点处氨基酸的疏水性对其抑制IV活性有巨大影响;D构型扫描并未发现肽序中对D构型绝对敏感的氨基酸残基。
　　3.对P19-8修饰后表现出明显的抗IV活性但溶解性较差的p19-8Y进行了水溶性提升修饰。发现P19-8Y序列C端的疏水性对其活性有重要影响,N端接亲水性氨基酸RRKK修饰后水溶性增加而活性不受影响。通过CCK8-Kit检测P19-8Y-EB不同浓度梯度下抑制H1N1致MDCK病变的IC50约为8.9μmol/L。
　　综上所述,本研究通过对具有HA抑制活性的P19进行修饰,获得了具有抗IV活性明显提升的多肽P19-8和P19-8Y,并通过在N端增加水溶性氨基酸RRKK获得了一条水溶性较好的多肽P19-8Y-EB。所修饰多肽在细胞水平及鸡胚模型中均表现出较好的抗IV活性,具有开发成为新型抗流感药物—HA抑制剂的潜力。

著录项

作者
汪崇文;
展开▼
作者单位

安徽医科大学;

展开▼
授予单位安徽医科大学;
学科药物分析
授予学位硕士
导师姓名王升启;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类呼吸道传染性病毒;抗病毒药物;
关键词
流感病毒; 血凝素抑制多肽; 结构修饰; 活性评价; 抗病毒药物;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. H1N1型流感病毒血凝素抑制肽的筛选研究 [J] . 汪崇文 ,丁晓然 ,杨静 . 国际药学研究杂志 . 2013,第001期
2. 中国毛虾流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的研究 [J] . 王海涛 ,王伟 ,陈铭 . 高等学校化学学报 . 2013,第011期
3. 高致病性禽流感病毒血凝素蛋白广谱中和表位模拟肽的筛选与鉴定 [J] . 宋慧娟 ,罗文新 ,郑振华 . 病毒学报 . 2008,第6期
4. 用^(125)I标记肽图估计近年来流行的甲型流感病毒血凝素的变异率 [J] . 严家新 ,黄鹤 ,潘南胜 . 中国病毒学 . 1992,第2期
5. 呼吸道蛋白酶TMPRSS2和HAT裂解流感病毒血凝素的亚细胞定位及对蛋白酶抑制剂的不同敏感性 [J] . . 微生物与感染 . 2010,第2期
6. 流感病毒血凝素(HA)变构肽鼻粘膜给药对胶原性关节炎的抑制作用 [C] . 孙健 ,龙丽 ,粟占国 . 全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议 . 2009
7. 基于H3流感病毒血凝素表位肽的重组Ferritin的免疫原性评价 [A] . 微生物学 . 2020

流感病毒血凝素抑制肽结构修饰与活性评价

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅