豚鼠神经干细胞体外分化毛细胞样细胞及耳蜗移植的实验研究

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目的:建立豚鼠神经干细胞体外培养的模型，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋创造基础。方法:取刚出生的豚鼠靠近海马区的脑组织，体外于无Ca、Mg的D-Hank's溶液中进行分离，单细胞悬液置于含有20％B27、20ng/ml EGF、20ng/ml bFGF的培养基中悬浮培养。用Nestin免疫细胞化学法及免疫荧光鉴定神经干细胞，传代培养。结果:所取的胎鼠细胞组织细胞可形成集落样生长的神经干细胞团，Nestin免疫细胞化学染色阳性，但是不表达Brn-3c和myosinⅦa。结论:小鼠的神经干细胞可经体外分离纯化，建立细胞系，具有明显的增殖能力可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的供体细胞。目的:体外诱导豚鼠神经干细胞向毛细胞样细胞分化，初步探讨神经干细胞移植治疗感音神经性聋的可行性。方法:取纯化的豚鼠神经干细胞，置于含有20％B27、20ng/ml EGF、20ng/mlbFGF、TGF-α、IGF-I、10％FBS的DMEM/F12培养基中贴壁培养，四周后，免疫组化鉴定毛细胞特异表型myosin Ⅶa，pan-cytokeratin。结果:培养细胞经免疫组化鉴定表达出毛细胞的特异性标记抗体myosinⅦa，pan-cytokeratin。结论:神经干细胞可经体外分离纯化向毛细胞分化，并表现出毛细胞的特异性表型，这可能为神经干细胞移植治疗感音神经性聋提供基础。目的：研究神经干细胞(Neural stem cells，NSC)移植入豚鼠耳内存活以及迁移情况。方法:豚鼠用白噪声制成神经性耳聋模型，取原代培养的神经干细胞，用Hoechst33342进行荧光素标记，在豚鼠内耳损伤后即刻移植入损伤耳内，移植后7～10天处死豚鼠，观察细胞标记荧光情况。处死前分别行ABR及40Hz诱发电位检测。结果:神经干细胞在豚鼠的内耳中可以存活并沿着注射部位的骨壁生长结论神经干细胞移植入噪声性耳聋豚鼠的耳内可存活，并沿着注射的部位向上迁移生长，为进一步研究神经干细胞在体内的分化和表达奠定了基础。

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作者
刘晓薇;
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作者单位

安徽医科大学;

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授予单位安徽医科大学;
学科耳鼻咽喉科学
授予学位硕士
导师姓名孙敬武,汪银凤;
年度 2008
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类耳蜗疾病;
关键词
神经干细胞; 体外培养; 培养标记;

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