五子衍宗丸对GnRH-a控制性超促排卵小鼠子宫S100A11蛋白影响的研究

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控制性超促排卵（COH）长方案(GnRH-a+HMG+HCG)在防止卵泡过早黄素化和提升卵子质量方面优于其他方案，在临床辅助生殖技术中得到广泛应用。但其超过生理剂量的外源性激素降低了子宫内膜容受性，造成胚胎着床率降低，仅为正常的30％左右，这种高排卵率、低着床率和低妊娠率现象成为生殖医学亟待解决的难题。钙结合蛋白S100A11可调节肿瘤细胞增殖、侵袭及播散，因此推测S100A11可能对与肿瘤发生发展机制相似的胚胎种植有一定的调控作用，可能参与子宫内膜容受性和免疫耐受的形成。现代药理研究表明中药五子衍宗丸具有提高生殖器官重量、平衡性激素分泌,提高机体免疫功能等作用，临床用于治疗生殖泌尿、抗衰老等多种疾病。　　本研究第一部分通过观察S100A11蛋白在子宫的分布及S100A11mRNA和蛋白在小鼠胚胎种植早期子宫中的表达，探讨了钙结合蛋白S100A11在胚胎种植中的作用，为早期诊断胚胎种植障碍相关疾病和预测妊娠结局提供新的指标。本研究第二部分建立长周期超促排卵动物模型，观察中药五子衍宗丸对GnRH-a长方案控制性超促排卵（COH）小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期S100A11mRNA及蛋白表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制，为临床辅助生殖过程中提高子宫内膜容受性、改善小鼠妊娠率和胚胎着床率提供理论依据。　　实验1钙结合蛋白S100A11在小鼠胚胎种植早期子宫中的表达　　目的：研究钙结合蛋白S100A11在小鼠胚胎种植早期子宫内膜中的表达及该蛋白在子宫内膜容受性中的作用。　　方法：取鼠龄8-10周雌性健康未孕 SPF级昆明小鼠30只，按雌∶雄比例3∶1合笼,检查到阴道栓确定为妊娠第0日，分别于孕3天、4天、5天、6天剖取子宫,采用免疫组织化学法、Real-time PCR和Western Blot法分别检测钙结合蛋白S100A11在妊娠早期子宫的细胞定位、mRNA和蛋白表达。　　结果：免疫组化结果显示 S100A11蛋白主要分布于小鼠子宫内膜腺上皮和腔上皮；Real-time PCR结果表明S100A11mRNA在围着床期均有表达，其中妊娠第四天表达量最高；Western Blot表明S100A11蛋白在围着床期子宫中均有表达，并在妊娠第四天、第五天明显升高。　　结论：钙结合蛋白S100A11调节了胚胎在子宫内膜上的粘附与侵入，参与了子宫内膜的容受性及免疫耐受。　　实验2五子衍宗丸对GnRH-a控制性超促排卵小鼠着床期S100A11蛋白的调控　　目的：观察GnRH-a长方案控制性超促排卵（COH）对小鼠阴栓率、妊娠率、着床期小鼠胚胎着床率及钙结合蛋白S100A11表达的影响，通过研究中药五子衍宗丸对COH小鼠着床期子宫S100A11表达的调控,探讨COH影响胚胎着床的机制，寻求有效改善COH低妊娠率的中药方剂。　　方法：模拟人类超排卵长方案，建立小鼠超促排卵模型。随机数字法将鼠龄8-10周雌性健康未孕 SPF级昆明小鼠90只随机分成3组:模型组(GnRH-a+HMG+HCG),中药组(五子衍宗丸+GnRH-a+HMG+HCG),对照组（生理盐水），每组30只。造模结束后每组各取10只小鼠剖取子宫；余鼠按照雌∶雄比例3∶1合笼，检查到阴道栓确定为妊娠第0日，分别于孕4天、5天各取10只小鼠剖取子宫，观察小鼠阴栓率和着床期子宫胚胎着床数及着床率;应用免疫组化法、Real-time PCR和Western blot方法分别检测小鼠着床期子宫内膜S100A11 mRNA及蛋白的表达。　　结果：模型组胚胎着床数高于对照组和中药组(P<0.01),但胚胎着床率和妊娠率均显著降低(P<0.05)，而中药组与对照组无明显差异。模型组着床期子宫内膜S100A11mRNA及蛋白表达下降,与对照组和中药组比较均有明显差异(P<0.05)，中药组与对照组无明显差异。　　结论：GnRH-a+HMG+HCG长方案 COH可使子宫内膜容受性相关因子 S100A11表达的下降，致使着床期内膜准备不足，子宫内膜容受性下降，着床窗口提前关闭，临床妊娠失败率升高。中药五子衍宗丸可上调因GnRH-a长方案COH所致下降的S100A11蛋白的表达，提高子宫内膜容受性，改善小鼠妊娠率和胚胎着床率。

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作者
陈阳;
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作者单位

天津中医药大学;

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授予单位天津中医药大学;
学科中医学
授予学位硕士
导师姓名付正英;
年度 2014
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正文语种 chi
中图分类
关键词
五子衍宗丸,控制性超促排卵,S100A11蛋白,子宫内膜;

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